[发明专利]一种快速增殖神经干细胞培养基

说明书

本发明公开一种快速增殖神经干细胞培养基，包括以下组成：以DMEM/F12培养基为基材，表皮细胞生长因子的含量为15～25ng/mL、转铁蛋白的含量为10～15μg/mL、碱性成纤维细胞生长因子的含量为15～25ng/mL、纤连蛋白的含量为15～25ng/mL、四型胶原蛋白组的含量为50～70ng/mL、抗生素的含量为0.05～0.13mg/mL、牛血清白蛋白的含量为40～60μg/mL、非必需氨基酸的含量为8～10μmol/mL以及B27细胞培养添加剂。通过非必需氨基酸为神经干细胞所必须的营养物质，避免因为营养物质吸收不完全造成的细胞分化现象，同时抗生素的添加减少分类过程中毒素影响的分裂速度。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种快速增殖神经干细胞培养基。

背景技术

随着社会的发展与科技的提升，美容从内容到形式上都有着不断的变化和提升。根据美容内涵的不同，现代美容可分为生活美容和医学美容两大部分。一般意义上生活美容是通过专业的护肤化妆品和专业的美容仪器作为辅助器械，对人体的面部肌肤进行全方位的护理和保养，但是这种保养的期限有限，需要经常性维护，以便更好的维护面部肌肤。还有一种通过医学治疗手段对面部肌肤进行一系列手术治疗，以便长时间来维护面部肌肤，但这种方法存在一定的手术危险性，并且使用的药物会长时间残留于人体皮肤内，会导致对人体的二次伤害。

神经干细胞(neural stem cell)是指存在于神经系统中，具有分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的潜能，从而能够产生大量脑细胞组织，并能进行自我更新，并足以提供大量脑组织细胞的细胞群。同时他也是一类具有分裂潜能和自更新能力的母细胞，它可以通过不对等的分裂方式产生神经组织的各类细胞。

但是由于神经干细胞的分裂能力强，在进行培养时，需要长时间存在于培养基中进行生长，但神经干细胞在生长过程中需要多种营养物质进行生长，同时在神经干细胞生长过程中，不同时期所需要的营养物质需求存在一定区别，需要对培养基的选材更加严格，但大多数培养基的营养成分单一，严重影响了神经干细胞的增殖速度，在一定的时间内难以获得足够的细胞数量。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种快速增殖神经干细胞培养基，解决了现有技术中存在培养基成分单一，影响神经干细胞的增殖速度。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种快速增殖神经干细胞培养基，包括以下组成：以DMEM/F12培养基为基材，表皮细胞生长因子的含量为15～25ng/mL、转铁蛋白的含量为10～15μg/mL、碱性成纤维细胞生长因子的含量为15～25ng/mL、纤连蛋白的含量为15～25ng/mL、四型胶原蛋白组的含量为50～70ng/mL、抗生素的含量为0.05～0.13mg/mL、牛血清白蛋白的含量为40～60μg/mL、非必需氨基酸的含量为8～10μmol/mL以及B27细胞培养添加剂。

进一步的，所述抗生素由含量为90～110U/mL青霉素、0.05～0.13mg/mL链霉素、200～300ng/mL两性霉素混合而成。

进一步的，所述非必需氨基酸为谷氨酸、酪氨酸、脯氨酸、甘氨酸、胱氨酸、丙氨酸、天门冬氨酸或丝氨酸的其中一种或混合。

进一步的，所述B27细胞培养添加剂的体积含量占DMEM/F12培养基的2～3％。

快速增殖神经干细胞培养基的使用方法，包括以下操作步骤：

于35～39℃温度环境下、空气CO₂含量3～8％下，将神经干细胞培养基置于无菌环境下，随后将神经干细胞贴壁培养，每2～3d更换培养基，待神经干细胞细胞达到90％融合度后消化，按1:4比例传代。

进一步的，所述培养的神经干细胞密度为5×10⁴～1×10⁵/mL。