[发明专利]circRNA在系统性红斑狼疮病变免疫异常检测方法

说明书

本发明属于免疫和分子生物检测技术领域，公开了一种circRNA在系统性红斑狼疮病变免疫异常检测方法，收集外周血单个核细胞PBMCs标本，通过RNA‑seq测序技术，对基因表达进行检测分析；挑选出20个存在显著性差异的基因；基于circRNA参与转录后调控，对候选基因进行匹配分析，筛选出存在靶向结合的miRNA；通过对靶向结合的miRNA归纳总结，筛选出SLE当中具有代表性研究价值的miRNA。在细胞和分子水平进一步深入探讨淋巴细胞免疫平衡异常调控SLE发病中的作用方式和分子机制；解析circRNA调控表达的方式和作用靶点，明确其介导的信号通路并确认circRNA发挥功能效应的分子途径。

技术领域

本发明属于免疫和分子生物检测技术领域，尤其涉及一种circRNA在系统 性红斑狼疮病变免疫异常检测方法。

背景技术

目前，最接近的现有技术：长期以来，抗dsDNA抗体、补体活性和免疫复 合物等免疫学检测一直是SLE疾病活动性的经典技术标志。但是主要障碍是1. 相关的基因及表达产物同时与其他自身免疫病相关，特异性不高；2.SLE发病早 期机体变化微小，病变产生的相关蛋白量很少，甚至无法出现；3个体之间存在 较大差异。本技术从病因遗传因素出发结合RNA-seq高通量检测手段寻找发病 特异性基因变量，并且探索了基因级联或相互作用启动疾病发生的方式。

系统性红斑狼疮(systemiclupuserythematosus，SLE)是一种临床表现多样、病情变化快的典型的自身免疫性疾病，以自身抗体产生、免疫复合物沉积、多器 官功能损害为主要特征。SLE缺乏有效治疗手段，常可导致患者死亡。因为目 前缺乏有效的诊断标志物和治疗标志物。所以研究SLE生物标志物，无论对于 早期诊断、病情活动监测、器官损害的可能性和损害程度的评估以及发现新的 治疗靶点均至关重要。

近年来，随着免疫学和分子生物学技术的不断发展，与SLE相关的新的发 病机制和抗体相继被发现。系统性红斑狼疮的管理对于临床医师来说仍是挑战， 关于该病的发病机制：系统性红斑狼疮(SLE)是一种典型的自身免疫性疾病， 其发病原因不清，发病机制也尚未明确。一般认为是多因素的：受遗传因素和 环境的影响，补体缺陷、B细胞和T细胞行为异常、细胞因子作用异常、细胞 凋亡异常等。诊断标志物和治疗标志物等仍有待澄清。进一步导致的技术问题: 很难从根本上找到调控疾病发生的靶点且操作难，可控性差等。

circularRNA(circRNA)叫做环形RNA，是一种新的内源性非编码RNA，作 为RNA家族的新成员成为研究热点。不具有5’帽子结构和3’尾巴结构，circRNA 是闭合的环状结构，没有5’-3’极性和聚核苷酸的尾巴结构。在包括肿瘤在内的 多种疾病的研究中，发现其与疾病的潜在关联，并在其中发挥重要的调控作用， 有巨大的潜力成为新型的临床诊疗靶标。随着RNA测序技术和生物信息学的发 展，显示在哺乳动物细胞中存在大量circRNA，其表达丰富、成内源性、结构保 守且稳定。circRNA最主要的功能研究是参与转录后调控，类似于一个内源性 RNA或miRNA的海绵，可以竞争性的抑制RNA/miRNA的转录调控。此外，circRNA还可以通过抑制转录起始位点调节可变剪切或转录。而且，circRNA还 可以调节其亲本基因的表达。circRNA是RNA家族中有一个值得关注的热点， 尽管目前人们对其了解还很浅，距离阐明其机制还相当遥远，但是其通过参与 转录调控，丰富了人们的认知。其时空特异性和稳定性使其能够成为良好的生 物标志物；而其与疾病的关联，可望成为潜在的临床诊疗标志物，具有巨大的 应用前景。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有的系统性红斑狼疮的发病机制、 诊断标志物和治疗标志物等不清楚。

解决上述技术问题的难度：很难从根本上找到调控疾病发生的靶点且操作 难，变量可控性差等。

解决上述技术问题的意义：可以从基因水平，细胞水平等角度研究探索疾 病诱因，进而找到可以特异、稳定、便捷、直观的检测标志物。降低不可控变 量带来的影响，为探索复杂疾病诱发提供方向。

发明内容