[发明专利]一种测定尿液中8-异构前列腺素F2α的装置和方法

权利要求书

1.一种尿液中8-异构前列腺素F2α的测定方法，其特征在于：适用于一种测定尿液中8-羟基异构前列腺素F2α的装置，包括带进样口的六通阀、进样器、富集泵、分析泵、检测器、在线固相萃取柱、分析柱和色谱工作站；带进样口的六通阀用于固相萃取柱和分析柱之间的切换；

包括如下步骤：

步骤（1），在制备好的样品进样后，用富集泵输送通过氧化石墨烯键合硅胶固相萃取柱富集，富集完后继续用2.0mL的流动相洗涤固相萃取柱；进样后，富集泵以25%甲醇为流动相；

其中，样品富集时，待测样品从进样器进入到分析系统中，通过富集泵输送由带进样口六通阀的第七进样口进入，从第四口流出通过固相萃取柱，待测成分富集在固相萃取柱上，再经第一口和第六口排到废液中；在该状态下，分析泵的流动相由六通阀的第二口进入，从第四口流出；

步骤（2），样品富集完后，通过六通阀切换，用分析泵输送流动相，从和样品富集相反的流向洗脱固相萃取柱，洗脱下来的成分流经分析柱分离，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量；在线固相萃取装置样品富集和样品分析均为独立的管路，互不交叉，色谱分析和固相萃取富集同时进行；分析泵以0.1%乙酸铵的45%甲醇为流动相；

其中，样品分析时，样品富集完后，通过六通阀切换，富集泵的流动相由六通阀的第五口排出，分析泵的流动相则由六通阀的第二口进，第一口流出，流经固相萃取柱，和样品富集相反的流向把固相萃取柱上富集的待分析成分洗脱下，并从第四口和第三口流出，流经分析柱分离，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量。

2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：步骤（1）中，样品的制备过程如下：

取7.5 mL采集的吸烟者尿液样品，加入内标工作液200 µL，用甲醇定容到10 mL；充分摇匀，在20 h内带回到实验室，20000r/min 高速离心 10 min；取上层清液约5.0 mL，用0.25 µm的针头过滤器过滤，供在线固相萃取富集用。

3.根据权利要求2所述的测定方法，其特征在于：内标为氘代8-异构前列腺素F2α。

4.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：富集完成后继续用1.5~4.0mL的流动相洗涤样品，富集泵的流速为1.0mL/min；进样量为0.5~2.0mL。

5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于：超高效液相色谱质谱分析条件如下：

色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH-C₁₈，2.1×30mm，1.7µm；流动相：内含0.1%的乙酸铵的45%的甲醇，流速0.6mL/min；

质谱条件如下：

气体为高纯氮气；电喷雾离子源负离子扫描；多重反应检测；电喷雾电压为4500 V，离子源温度：500 ℃；辅助气Gas1压力为60 psi，辅助气Gas2压力为80 psi，气帘气压力为20psi，碰撞气压为 8 psi；8-异构前列腺素F2α检测离子对为353.30/193.10，氘代内标检测离子对为357.30/197.10，离子驻留监测时间为100 ms；去簇电压：80 V，入口电压：10 V，碰撞能量：30V，碰撞池出口电压：15V。