[发明专利]一种测定尿液中8-异构前列腺素F2α的装置和方法

说明书

本发明涉及一种测定尿液中8‑异构前列腺素F2α的装置和方法，属于分析化学领域。该方法为：制备好的样品进样后，用富集泵输送通过氧化石墨烯键合硅胶固相萃取柱富集。样品富集完后，通过六通阀切换，用分析泵输送流动相，从和样品富集相反的流向洗脱固相萃取柱，洗脱下来的成分流经分析柱分离，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量。本发明中在线固相萃取方法的使用实现了样品在富集柱上高倍数富集，在色谱峰没有明显变宽的前题下使样品进样量提高近三个数量级，方法的分析灵敏度大大提高，可准确测定尿液样品中pg/mL数量级的8‑异前列腺素F2α含量。为吸烟与氧化应激反应相关性的研究提供了灵敏、准确、可靠的新方法。

技术领域

本发明涉及一种测定装置，尤其是一种测定尿液中8-异构前列腺素F2α的装置，还涉及测定方法，属于分析仪器领域。

背景技术

氧化应激是指体内氧化与抗氧化作用失衡，由自由基在体内产生倾向于氧化的一种负面作用，会导致中性粒细胞炎性浸润，蛋白酶分泌增加，产生大量氧化中间产物。在生物体内，由于自由基和其它高活性化学物质浓度低且寿命短,很难直接测定。因此，通过分析自由基、活性物质、氧化应激、自旋捕捉、DNA标志物、脂质和蛋白质氧化应激、细胞荧光探针等检测方法在定性检测体内、体外活性物质和氧化损伤中可能出现错误和人为影响因素。

8-羟基异构前列腺素F2α是代表性的氧化应激的重要生物标志物，其含量对于评估体内氧化损伤程度以及研究疾病病理过程都有重要作用。

目前，8-异构前列腺素F2α可采用酶联免疫法、GC-MS和HPLC/MS/MS进行分析。HPLC-MS/MS法具有较好的灵敏度和选择性，适宜于8-异构前列腺素F2α的分析。由于尿样中该化合物含量较低，又存在有其他结构类似的化合物，样品通常是需要固相萃取或是液液萃取-固相萃取相结合的方式进行净化，浓缩后进行定量；样品前处理过程需多次转移，不但操作麻烦，而且引入分析误差的因素多。另一方面，尿样品基质背景复杂，采用HPLC/MS/MS分析时，样品的基质效应也会影响分析结果。

因此寻找一种有效、可靠、方便的方法测定8-羟基异构前列腺素F2α的含量，以此来评估卷烟烟气暴露对氧化应激的影响，是十分必要的。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种吸烟者尿液中8-异构前列腺素F2α测定装置和方法，该方法能满足吸烟者尿液中8-异构前列腺素F2α快速、准确测定的要求，为卷烟烟气暴露对氧化应激的影响评价提供了科学、简便的新方法。

除非另有说明，本发明所采用的百分数均为质量百分数。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种测定尿液中8-羟基异构前列腺素F2α的装置，所述的装置包括带进样口的六通阀、进样器、富集泵、分析泵、检测器、在线固相萃取柱、分析柱和色谱工作站；带进样口的六通阀用于固相萃取柱和分析柱之间的切换；固相萃的固相萃取材料为氧化石墨烯键合硅胶；

样品富集时，待测样品从进样器进入到分析系统中，通过富集泵输送由带进样口六通阀的第七进样口进入，从第四口流出通过固相萃取柱，待测成分富集在固相萃取柱上，再经第一口和第六口排到废液中；在该状态下，分析泵的流动相由六通阀的第二口进入，从第四口流出；

样品分析时，样品富集完后，通过六通阀切换，富集泵的流动相由六通阀的第五口排出，分析泵的流动相则由六通阀的第二口进，第一口流出，流经固相萃取柱，和样品富集相反的流向把固相萃取柱上富集的待分析成分洗脱下，并从第四口和第三口流出，流经分析柱分离，再通过检测器检测测定样品中待分析成分含量。

本发明涉及的一种尿液中8-异构前列腺素F2α的测定方法，包括如下步骤：

步骤(1)，在制备好的样品进样后，用富集泵输送通过氧化石墨烯键合硅胶固相萃取柱富集，富集完后继续用2.0mL的流动相洗涤固相萃取柱；