[发明专利]通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法

权利要求书

1.一种通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1.柴胡疏肝散的制备；

步骤2.肝郁证及冰醋酸胃溃疡结合模型的建立；

步骤3.免疫组化方法检测p38MAPK、ERK蛋白的表达；

步骤4.Westernblot法检测p38MAPK、ERK蛋白的表达。

2.根据权利要求1所述的通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法，其特征在于，步骤1具体为：按照以下配方准确称取各个原料药：陈皮、柴胡各6g，川芎、枳壳、芍药各4.5g，甘草1.5g，香附4.5g，然后充分混合制备得到柴胡疏肝散，以上原料药均购自华润三九医药股份有限公司。

3.根据权利要求1所述的通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法，其特征在于，步骤2.具体为：60只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、奥美拉唑组、柴胡疏肝散组，每组10只；正常对照组无特殊处理正常饮食，其余各组用夹尾激怒法制作肝郁证大鼠模型；每日四次8:00，11:00，14:00，17:00用鼠夹夹大鼠尾巴远端1/3处，每次夹尾刺激持续30分钟，如有破损用碘伏涂擦，连续刺激7天后；禁食24小时，在肝郁大鼠模型基础上运用改进后的Okabe冰醋酸方法制作肝郁大鼠胃溃疡模型。

4.根据权利要求3所述的通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法，其特征在于，所述柴胡疏肝散组，所述柴胡疏肝散的浓度为2.5、1.25、0.75g/ml。

5.根据权利要求1所述的通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法，其特征在于，步骤3具体为：采用各组小鼠胃组织切片，脱蜡至水，抗原修复，灭活内源性酶，封闭，滴加一抗：p38MAPK、ERK，滴加二抗，DAB显色，复染、脱水封片，镜检数据统计p38MAPK、ERK表达及定位。

6.根据权利要求1所述的通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法，其特征在于，步骤4具体为：称取冻存黏膜组织样本

0.1g，按照碧云天蛋白抽提试剂盒说明书步骤操作，加入裂解液在冰浴下3000r/min匀浆，充分裂解后，离心收取上清液，2，2'-联喹啉-4，4'-二羧酸二钠蛋白BCA法定量后，加入上样缓冲液并煮沸5min，样本以Western blot法检测p38MAPK、ERK蛋白的表达量变化。