[发明专利]通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法

说明书

本发明公开了一种通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法，包括以下步骤：步骤1.柴胡疏肝散的制备；步骤2.肝郁证及冰醋酸胃溃疡结合模型的建立；步骤3.免疫组化方法检测p38MAPK、ERK蛋白的表达；步骤4.Western blot法检测p38MAPK、ERK蛋白的表达。本发明观察疏肝解郁法对肝郁证胃溃疡大鼠胃黏膜JNK/SAPK、ERK的影响，从分子生物学上阐明疏肝解郁法治疗胃溃疡的内在机制，探索其对肝郁证胃溃疡大鼠胃黏膜损伤修复的影响及其疗效的作用机制，从而为治疗胃溃疡的中医药治疗和新药开发奠定实验基础。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体地说，涉及一种通过JNK/SAPK、ERK信号通路促进胃黏膜修复治疗胃溃疡的作用机制的研究方法。

背景技术

胃溃疡属于祖国医学的胃脘痛、心痛或肝胃气痛的范畴。此证发生的原因通常有两类，一是由于忧思恼怒，肝气失调，横逆犯胃引起；二是由于脾不健运、胃气不降而导致。

2.1肝气郁滞与胃溃疡的临床与基础研究

胃溃疡的病位在胃，但与肝、胆、脾却有密切关系，情志不调、饮食不规律、气血运行不通畅和外邪感受等脏腑功能的失调，都会引起该病的发生和恶化。

现代研究也表明，肝气郁滞与胃溃疡二者有高度的相关性。如沈舒文等认为消化性溃疡虽病位在胃，但肝主疏泄，故其发病与肝脾失调最为相关，肝失疏泄则脾失健运，胃病及脾则碍运，而脾胃病又会涉及肝，导致气郁。高金莲、于彦芳、杨金池、申广义、高于英以及蔡悦等人认为肝郁是胃肠运动障碍的病理基础，应以肝为中心进行辨证，治疗上理胃必调肝脾，同时部分医家以五行生克制化理论为依据，认为胃脘痛多与木气偏胜，肝胃失和有关，且先贤有“肝为起病之源，胃为传病之所”及“治脾胃必先调肝气”的古训，因此均以疏肝健脾为治疗的不二法门，并取得良好的临床疗效。

胃溃疡的一个重要病理学特征就是胃黏膜组织存在大量炎性细胞浸润及明显的炎症反应。炎性细胞通过释放氧自由基和促炎性细胞因子等多种炎性介质，产生瀑布级联效应，在胃黏膜损伤的发生和发展中发挥了关键作用。

细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端调节激酶(JNK)/应激活化蛋白激酶(SAPK)、p38MAPK和ERK5是MAPK信号转导通路的4个主要家族成员。MAPK是细胞内的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在哺乳动物细胞多种信号转导通路中起重要作用。研究证实，MAPK信号转导通路存在于大多数细胞内，在将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内，并引起细胞生物学反应(如细胞增殖、分化、转化及凋亡等)的过程中具有至关重要的作用。ERK信号通路通常被认为在生长因子介导的细胞增殖和分化过程中发挥重要作用，并可作为阻止细胞凋亡的存活因子。JNK/SAPK及p38MAPK为应激激活的蛋白激酶，研究表明，这两条通路的激活参与多种应激所介导的细胞凋亡。由此可见，MAPK信号传导通路的重要作用就是在胞外环境发生变化时，调节细胞反应，ERK通路主要参与细胞的增生和分化，JNK/SAPK通路和p38MAPK通路则主要参与细胞的应激反应和凋亡。

ERK通路可以在受体酪氨酸激酶、Ca2+、蛋白激酶C的介导下被激活。激活过程首先是Ras的活化，然后活化的Ras与丝/苏氨酸蛋白激酶Raf-1的氨基端结合，激活Raf-1，进而激活MEK，最终导致ERK1/2的激活。活化的ERK1/2移位至细胞核，促进多种核内转录因子的磷酸化，如e-Jun、e-Fos和ELK-1等，从而调控基因表达，促进细胞的增殖与分化。ERK通路活性增高不仅可促进胃黏膜细胞的增殖，而且该通路的激活对于胃溃疡的愈合也具有重要意义。Pai等研究发现，在大鼠胃溃疡的愈合过程中，ERK 1/2活性显著增强，阻断这一通路可以明显延缓胃溃疡的愈合过程。