[发明专利]一种基于纳米金颗粒的蛋白标记方法

权利要求书

1.一种基于纳米金颗粒的蛋白标记方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)，还原蛋白的巯基；

(2)，将巯基已被还原的蛋白和纳米金悬浮液混合，以进行纳米金和巯基的耦连反应；其中，纳米金悬浮液通过将纳米金颗粒溶解到C-缓冲液中制备得到，所述C-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述还原蛋白的巯基包括：

(a)，在蛋白对应的超滤管中，使用R-缓冲液混合抗体；

(b)，在步骤(a)中的蛋白对应的超滤管中加入用R-缓冲液混合后巯基还原剂，以还原蛋白的巯基；其中，

所述R-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述巯基还原剂为TCEP。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，蛋白为带巯基的抗体；蛋白对应的超滤管为50kDa超滤管。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(a)包括：将300μl的R-缓冲液加入到蛋白对应的超滤管中，加入100μg的蛋白，混匀后，离心后，去上清；

步骤(b)包括：在步骤(a)中的去了上清后的液体中，加入100μl的4mM TCEP R-缓冲液，其中，100μl的4mM TCEP R-缓冲液通过将1μl的TCEP和124μl R-缓冲液制备得到。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤(b)包括：在37℃孵育2小时，以还原蛋白的巯基。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述纳米金颗粒使用N-羟基硫代琥珀酰亚胺或马来酰亚胺修饰。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)中，在超滤管中，将巯基已被还原的蛋白和纳米金溶液混合，以进行纳米金和巯基的耦连反应。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，纳米金还可标记蛋白的氨基基团。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤(2)之后，所述方法还包括：

(3)，使用w-缓冲液洗脱被金属标记后的抗体，所述w-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。