[发明专利]一种基于纳米金颗粒的蛋白标记方法

说明书

本申请涉及蛋白标记技术领域，具体涉及一种基于纳米金颗粒的蛋白标记方法，所述方法包括如下步骤：(1)，还原蛋白的巯基；(2)，将巯基已被还原的蛋白和纳米金悬浮液混合，以进行纳米金和巯基的耦连反应；其中，纳米金悬浮液通过将纳米金颗粒溶解到C‑缓冲液中制备得到，所述C‑缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

技术领域

本申请涉及蛋白标记技术领域，具体涉及一种基于纳米金颗粒的蛋白标记方法。

背景技术

在监测生物过程、辅助检测(例如化合物的可靠定量、蛋白质修饰的特异性检测)或者纯化标记后的蛋白及其结合对象等都需要应用到蛋白质标记技术。高效的蛋白质标记技术能够提高检测灵敏度以及简化检测工作流程。

目前有多种蛋白质标记技术，如同位素标记、荧光标记、量子点标记、生物素标记、酶联标记等来帮助我们研究感兴趣的蛋白质的丰度、位置、相互作用、翻译后修饰、功能，乃至监测活细胞中的蛋白质运输等问题。使用金属对蛋白质进行标记，能够避免样本的自发荧光背景的干扰、无生物危害、极高的灵敏度、高通零等优势，具备极大的应用情景。随着质谱仪及质谱流式细胞技术的发展越来越迅速，发展越来越迅速，国内外对应用于该技术的金属蛋白试剂需求也越来越大，以满足高维度细胞检测的需求。

发明内容

本申请提供了一种基于纳米金颗粒的蛋白标记方法，可以把蛋白质巯基与纳米金颗粒进行耦连，可以通过对金元素的检测，实现对于被标记蛋白的检测，且方法简便、经济、实用性强、效率和可靠性较高。。

本申请提供了一种基于纳米金颗粒的蛋白标记方法，所述方法包括如下步骤：

(1)，还原蛋白的巯基；

(2)，将巯基已被还原的蛋白和纳米金悬浮液混合，以进行纳米金和巯基的耦连反应；其中，纳米金悬浮液通过将纳米金颗粒溶解到C-缓冲液中制备得到，所述C-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

在一些实施例中，所述还原蛋白的巯基包括：

(a)，在蛋白对应的超滤管中，使用R-缓冲液混合抗体；

(b)，在步骤(a)中的蛋白对应的超滤管中加入用R-缓冲液混合后巯基还原剂，以还原蛋白的巯基；其中，

所述R-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。

在一些实施例中，所述巯基还原剂为TCEP。

在一些实施例中，所述蛋白为CD4抗体；蛋白对应的超滤管为50kDa超滤管。

在一些实施例中，步骤(a)包括：将300μl的R-缓冲液加入到蛋白对应的超滤管中，加入100μg的蛋白，混匀后，离心后，去上清；

步骤(b)包括：在步骤(a)中的去了上清后的液体中，加入100μl的4mM TCEP R-缓冲液，其中，100μl的4mM TCEP R-缓冲液通过将1μl的TCEP和124μl R-缓冲液制备得到。

在一些实施例中，步骤(b)包括：在37℃孵育2小时，以还原蛋白的巯基。

在一些实施例中，所述纳米金颗粒使用N-羟基硫代琥珀酰亚胺或马来酰亚胺修饰。

在一些实施例中，在步骤(2)中，在超滤管中，将巯基已被还原的蛋白和纳米金溶液混合，以进行纳米金和巯基的耦连反应。

在一些实施例中，纳米金还可标记蛋白的氨基基团。

在一些实施例中，在步骤(2)之后，所述方法还包括：(3)，使用w-缓冲液洗脱被金属标记后的抗体，所述w-缓冲液为MAXPAR多金属标记试剂盒中的试剂。