[发明专利]狂犬病疫苗抗原含量检测方法及试剂或试剂盒

权利要求书

1.一种狂犬病疫苗抗原含量检测方法，其特征在于，所述检测方法包括：

制备单克隆抗体包被酶标板，并固相化所述单克隆抗体；

将待测疫苗、标准疫苗分别按照倍比梯度稀释，将所述单克隆抗体包被酶标板洗板、拍干，将不同梯度稀释的所述待测疫苗和所述标准疫苗分别加入所述单克隆抗体包被酶标板中，37℃孵育1h；

将含有所述待测疫苗和标准疫苗的酶标板洗板拍干，再加入鼠多克隆抗体作为一抗，将含有所述一抗的酶标板封口后置于37℃孵育1h～2h；

将所述含有一抗的酶标板洗板拍干，再加入适宜稀释度的辣根酶标记山羊抗小鼠过氧化物作为二抗，得到含有二抗的酶标板，37℃孵育1h～2h；

将所述含有二抗的酶标板的洗板后，加入显色液，室温下避光反应设定时间，再加入终止液终止反应；

将所述终止反应的酶标板放入酶标仪中，获取所述标准疫苗和所述待测疫苗在波长450nm处的OD值，计算所述待测疫苗的浓度。

2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，制备所述单克隆抗体包被酶标板包括：

取所述单克隆抗体稀释后，加入酶标板中，2-8℃孵育过夜；

将所述单克隆抗体包被酶标板洗板3次后，加入封闭液封闭所述抗体，

再加入磷酸缓冲盐溶液将所述单克隆抗体固相化，制得所述单克隆抗体包被酶标板。

3.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述单克隆抗体为针对狂犬病病毒糖蛋白抗原表位的人源化单克隆抗体。

4.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述单克隆抗体包被酶标板内单克隆抗体添加量为100μl/孔，所述单克隆抗体浓度为1-20μg/ml。

5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述封闭液为牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和葡萄糖中的一种，所述封闭液添加量为300μl/孔。

6.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述磷酸缓冲盐溶液内含有蔗糖和果糖。

7.根据权利要求1或2所述的检测方法，其特征在于，所述多克隆抗体采用鼠脑来源狂犬病病毒制备。

8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，计算所述待测疫苗的浓度包括：

获取所述标准疫苗和所述待测仪表在酶标仪中波长450nm处的OD值；

依据所述标准疫苗波长450nm处的OD值建立浓度—OD值标准曲线；

将所述待测疫苗450nm处的OD值带入所述标准曲线计算出所述待测疫苗的浓度。

9.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述酶标仪中还设置波长630nm，用于检测杂质干扰对照值。

10.一种狂犬病疫苗抗原含量检测试剂或试剂盒，其特征在于，所述试剂或试剂盒包括：人源化单克隆抗体、鼠多克隆抗体、辣根酶标记山羊抗小鼠过氧化物、显色液、终止液及医学上可接受的辅助材料。