[发明专利]狂犬病疫苗抗原含量检测方法及试剂或试剂盒

说明书

本发明提供了一种狂犬病疫苗抗原含量检测方法及试剂或试剂盒，所述检测方法包括：制备单克隆抗体包被酶标板，并固相化所述单克隆抗体；将待测疫苗、标准疫苗分别按照倍比梯度稀释，加入所述单克隆抗体包被酶标板中，孵育；再加入鼠多克隆抗体作为一抗，再加入适宜稀释度的辣根酶标记山羊抗小鼠过氧化物作为二抗，获取所述标准疫苗和所述待测疫苗在波长450nm处的OD值，计算所述待测疫苗的浓度。本发明通过设置人源化单克隆抗体包被酶标板、多克隆抗体作为一抗进行酶联免疫吸附实验检测狂犬病毒疫苗的抗原含量，且本发明的检测方法检测周期短、检测原料可长期储存，疫苗效价的检测结果简单易得。

技术领域

本发明属于生物制剂领域，特别涉及一种狂犬病疫苗抗原含量检测方法及试剂或试剂盒。

背景技术

狂犬病是一种由狂犬病毒引起的人兽共患传染病，一旦发病，死亡率几乎达100％。狂犬病病毒糖蛋白(GP)是狂犬病毒的主要保护性抗原，能诱导机体产生中和抗体，同时还与病毒的毒力、神经嗜性，神经和脑内的运输、侵染和分布等有关。狂犬病疫苗的效价与病毒的糖蛋白密切关联，而现行版药典推荐NIH法体外检测作为狂犬病疫苗效价评价的标准方法。

NIH法是采用小鼠体内注射疫苗后，再用CVS攻击毒攻毒，经过与标准抗原比较后计算疫苗效价。NIH法检测需要大量小鼠，且每个实验周期约一个月时间，导致狂犬疫苗检测周期延长。且实验过程中由于活体参与，对小鼠状态和表现需要密切观察，导致检测成本高，疫苗效价计算繁琐。

发明内容

针对上述问题，本发明提供了一种狂犬病疫苗抗原含量检测方法及试剂或试剂盒。

一种狂犬病疫苗抗原含量检测方法，所述检测方法包括：

制备单克隆抗体包被酶标板，并固相化所述单克隆抗体；

将待测疫苗、标准疫苗分别按照倍比梯度稀释，将所述单克隆抗体包被酶标板洗板、拍干，将不同梯度稀释的所述待测疫苗和所述标准疫苗分别加入所述单克隆抗体包被酶标板中，37℃孵育1h；

将含有所述待测疫苗和标准疫苗的酶标板洗板拍干，再加入鼠多克隆抗体作为一抗，将含有所述一抗的酶标板封口后置于37℃孵育1h～2h；

将所述含有一抗的酶标板洗板拍干，再加入适宜稀释度的辣根酶标记山羊抗小鼠过氧化物作为二抗，得到含有二抗的酶标板，37℃孵育1h～2h；

将所述含有二抗的酶标板的洗板后，加入显色液，室温下避光反应设定时间，再加入终止液终止反应；

将所述终止反应的酶标板放入酶标仪中，获取所述标准疫苗和所述待测疫苗在波长450nm处的OD值，计算所述待测疫苗的浓度。

进一步地，制备所述单克隆抗体包被酶标板包括：

取所述单克隆抗体稀释后，加入酶标板中，2-8℃孵育过夜；

将所述单克隆抗体包被酶标板洗板3次后，加入封闭液封闭所述抗体，

再加入磷酸缓冲盐溶液将所述单克隆抗体固相化，制得所述单克隆抗体包被酶标板。

进一步地，所述单克隆抗体为针对狂犬病病毒糖蛋白抗原表位的人源化单克隆抗体。

进一步地，所述单克隆抗体包被酶标板内单克隆抗体添加量为100μl/孔，所述单克隆抗体浓度为1-20μg/ml。

进一步地，所述封闭液为牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖和葡萄糖中的一种，所述封闭液添加量为300μl/孔。

进一步地，所述磷酸缓冲盐溶液内含有蔗糖和果糖。

进一步地，所述多克隆抗体采用鼠脑来源狂犬病病毒制备。

进一步地，计算所述待测疫苗的浓度包括：