[发明专利]一种基于双抗夹心双波段荧光免疫的检测方法

权利要求书

1.一种基于双抗夹心双波段荧光免疫的检测方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：

步骤1：将已分别进行不同荧光波段标记的抗体CAg1和TAg1设置在测试条的结合垫上，CAg1和TAg1的光谱波段不同，配置已知浓度的C线抗原CAb；在结合垫上浸入样品，抗体CAg1和TAg1被溶解，自样品端向吸水端流动；

步骤2：预设样品中含有待测浓度的TAb；

步骤3：得到抗原CAb和TAb分别与结合垫上的抗体CAg1和TAg1结合后的结合物CAg1-CAb和TAg1-TAb浓度、未结合的抗原CAb和TAb浓度；

结合物CAg1-Cab的浓度为Q1，Q1＝kc*Sc*[CAb]_原；

结合物TAg1-TAb的浓度为Q2，Q2＝kt*St*[TAb]_原；

未结合的抗原CAb的浓度为Q3，Q3＝(1-kc)*Sc*[CAb]_原；

未结合的抗原TAb的浓度为Q4，Q4＝(1-kt)*St*[TAb]_原；

其中，Sc和St分别为结合垫对于抗原CAb和TAb的释放系数，kc和kt分别为结合垫对于抗原CAb和TAb的反应平衡系数，[CAb]_原和[TAb]原分别为抗原CAb和TAb的初始浓度；

步骤4：步骤3的所有结合物及抗原到达测试线后，与包膜抗体TAg2进行结合，得到特异性结合物TAg1-TAb-TAg2和TAb-TAg2、非特异性结合物CAg1-CAb-TAg2和CAb-TAg2的浓度；

特异性结合物TAg1-TAb-TAg2的浓度为W1，W1＝kt*St*[TAb]原*Ptt；

特异性结合物TAb-TAg2的浓度为W2，W2＝(1-kt)*St*[TAb]_原*Ptt；

非特异性结合物CAg1-CAb-TAg2的浓度为W3，W3＝kc*Sc*[CAb]_原*Ptc；

非特异性结合物CAb-TAg2的浓度为W4，W4＝(1-kc)*Sc*[CAb]_原*Ptc；

其中，Ptt和Ptc分别所有的结合物与测试线处的包膜抗体TAg2的特异性结合概率和非特异性结合概率；

步骤5：步骤4的所有结合物及抗原到达控制线后，与包膜抗体CAg2进行结合，得到特异性结合物CAg1-CAb-CAg2和CAb-CAg2、非特异性结合物TAg1-TAb-CAg2和TAb-CAg2的浓度；

特异性结合物CAg1-CAb-CAg2的浓度为M1，M1＝kc*Sc*[CAb]_原*(1-Ptc)*Pcc；

特异性结合物CAb-CAg2的浓度为M2，M2＝(1-kc)*Sc*[CAb]_原*(1-Ptc)*Pcc；

非特异性结合物TAg1-TAb-CAg2的浓度为M3，M3＝kt*St*[TAb]_原*(1-Ptt)*Pct；

非特异性结合物TAb-CAg2的浓度为M4，M4＝(1-kt)*St*[TAb]_原*(1-Ptt)*Pct；

其中，Pcc和Pct分别所有的结合物与控制线处的包膜抗体CAg2的特异性结合概率和非特异性结合概率；

步骤6：通过扫描，检测测试线和控制线上结合的不同荧光信号微球标记的物质中CAg1和TAg1的浓度，通过不同波段的荧光强度计算得到被测物的浓度TAb；

检测得到TAg1-TAb-TAg2的荧光信号为F_Ts1，CAg1-CAb-TAg2的荧光信号为F_Ts2，TAg1-TAb-CAg2的荧光信号为F_Cs1，CAg1-CAb-CAg2的荧光信号为F_Cs2；令则有

故得到其中，

2.根据权利要求1所述的一种基于双抗夹心双波段荧光免疫的检测方法，其特征在于：所述步骤6中，CAg1和TAg1经过荧光信号微球标记，波长分别为已知的s1和s2，s1≠s2。

3.根据权利要求1所述的一种基于双抗夹心双波段荧光免疫的检测方法，其特征在于：SK可以通过标定曲线进行校正。

4.根据权利要求1所述的一种基于双抗夹心双波段荧光免疫的检测方法，其特征在于：SP可以通过标定曲线进行校正。