[发明专利]一种兔抗人肌红蛋白多克隆抗体血清的制备方法

说明书

本发明公开了一种兔抗人肌红蛋白多克隆抗体血清的制备方法，该方法包括以下步骤：抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；使用上述抗原乳剂对兔进行多次注射；血清效价检测：注射后8‑10天采血，分离血清，检测其双扩效价；首次注射部位为10个，后足掌及背部皮下选取多个部位点进行注射，第二次到第五次免疫注射部位在背部皮下选取多个部位点进行注射，第六次免疫注射部位为兔耳静脉注射。采用本发明方法，成本低，过程简单，生产抗体质量稳定，抗体生产速度快，抗体水平高，抗原用量小。使大规模生产高质量诊断试剂原料成为可能，更好地服务于诊断行业。

技术领域

本发明属于生命科学技术领域，具体地说是一种兔抗人肌红蛋白多克隆抗体血清的制备方法。

背景技术

肌红蛋白是一种小分子蛋白质，其分子结果与血红蛋白相似，具有在肌细胞内转运和贮存氧的功能。人体心肌、骨骼肌内含有大量肌红蛋白，正常人的血液中很少，主要由肾脏代谢并排泄。当心肌或横纹肌有损伤时，肌红蛋白便释放入血中，血清中的肌红蛋白即可明显升高。因此，测定血清肌红蛋白可作为早期诊断心肌梗死的指标。

抗血清为含有某一类具有特异免疫功能的抗体分子的血清，一般为人工注射某类抗原后制备的动物血清。一种抗原能否引起抗体生成反应，一方面取决于抗原分子表面有无抗原决定簇(Antigenic determinant)，另一方面取决于机体的免疫状态，当具备以上两个条件后，抗体生成将遵循抗体生成的一般规律——初次反应和再次反应。抗原的种类繁多，包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成性抗原以及基因工程抗原等，不同的抗原免疫动物具有不同的特殊性。一般完全抗原免疫动物需加用佐剂，尤其在使用可溶性抗原时，以期得到高效价的抗血清；合成性抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物，方可获得理想的免疫效果。使用佐剂后可增加抗原的免疫原性和延长抗原在机体内存留的时间，从而改变了抗原原有的免疫原性。

目前，国内外多家生物公司开发出了常规科学试验和医学检测用特异性免疫血清，如羊抗人免疫血清、羊抗鼠免疫血清、兔抗人免疫血清、兔抗鼠免疫血清等等。然而，相关的调查研究表明，大概一半左右的常用商业化抗体对目标蛋白的识别能力极低。使用这些低质量的抗体是对着整个诊断试剂行业的污染，而且影响到科学研究的真实性。因此目前市场急需高质量的免疫诊断原料以促进产业的更好发展。

CN107163140A公开了一种羊抗人肌红蛋白抗血清的制备方法，该方法包括以下步骤：抗原准备：选用人肌红蛋白抗原，注射前以弗氏佐剂进行乳化得抗原乳剂；第一次注射后14天进行第二次注射；第二次注射后12天进行第三次注射；第三次注射后10天进行第四次注射；第四次注射后8天进行第五次注射；第五次注射后8天进行第六次注射；第六次注射后8天进行第七次注射；血清效价检测：注射后8-10天采血，分离血清，检测其双扩效价；以上每次免疫注射部位均在动物体上选取24个部位点进行注射。

CN109988241A公开了一种特异性识别人免疫复合物的抗体及其制备方法和用途，所述能够特异性识别人免疫复合物中与抗原结合后的靶标抗体，但不识别游离的人IgG以及游离的靶标抗体，避免非特异性抗体在间接法均相免疫检测中的干扰。

CN110161255A公开了一种肌红蛋白检测试剂盒，应用于胶乳增强免疫比浊法，包括试剂R1、R2，其特征在于：试剂R1为标记了肌红蛋白特异性抗体的胶乳颗粒溶于缓冲液中形成，试剂R2为缓冲液，胶乳颗粒在缓冲液中的浓度为55-90ng/L，胶乳颗粒的粒径为46-77nm，胶乳颗粒与肌红蛋白特异性抗体的质量比为7：4-9。

CN1123771C公开了一种急性心肌梗塞检测试剂盒，包括：多种抗心肌梗塞血液生化标志物的抗体；一微标盘，该微标盘中具有多个第一微标盘孔和多个第二微标盘孔，其中每一第一微标盘孔是用以固定所述抗体中的一种，由此而从一受检体中分离出一种心肌梗塞血液生化标志物，而每一第二微标盘孔是用以固定该受检体中各种心肌梗塞血液生化标志物；以及多种试剂，是用以测定所述每一第一微标盘孔和每一第二微标盘孔中的心肌梗塞血液生化标志物的含量，以得到多个比值。