[发明专利]一种难溶注射剂细菌内毒素的检测方法

说明书

本发明提供一种新的难溶注射剂细菌内毒素检测方法，检测方法如下：将难溶注射剂粉末溶解在与水不互溶的有机溶剂中，然后用细菌内毒素检查用水萃取有机相中的细菌内毒素，取水相溶液作为供试品溶液，采用凝胶法进行细菌内毒素检测。该方法有效解决了内毒素被样品包裹而不能全部释放的问题，且有机溶剂不干扰检测，对保证难溶性注射剂的安全性具有非常重要的意义。

技术领域

本发明属于微生物检验领域，具体涉及一种难溶注射剂细菌内毒素的检测方法。

技术背景

无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药，产品的无菌绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验。细菌内毒素是注射剂药品中的主要污染物质。在注射剂产品开发中，为了保证患者用药安全，需对注射剂中细菌内毒素含量进行严格的控制。

细菌内毒素是热原的主要代表物质，内毒素大量进入血液就会引发热原反应，导致发热、白细胞反应、内毒素休克及扩散性血管内凝血等。凝胶法是2015版中国药典收录的细菌内毒素检查法之一，使用鲎试剂来定性检测内毒素。这种检测方法易操作、准确性好、实用性较强。采用凝胶法检测难溶注射剂中的细菌内毒素时，因难溶注射剂粉末不溶于细菌内毒素检查用水，内毒素不能完全检出，通常需开发专门的检测方法进行检测内毒素含量测定。

CN 109387638 A公开了一种参麦注射液内毒素检查方法，该专利中通过干扰预试验，确定供试品至少稀释16倍才能消除干扰，实现供试品检测，表明凝胶法适用于参麦注射液等注射剂产品细菌内毒素检测。然而，采用凝胶法进行难溶注射剂粉末细菌内毒素的检测时，样品几乎不溶于细菌内毒素检查用水，导致难溶注射剂粉末中包裹的细菌内毒素无法提取，故不能采用细菌内毒素检查用水直接溶解稀释的方法进行检测。

CN 103837673 A公开了一种检测难溶性盐酸溴己新原料的细菌内毒素含量的方法，该专利中通过用DMSO溶解盐酸溴己新粉末，进一步采用细菌内毒素检查用水稀释至1600倍制成盐酸溴己新供试液，实现细菌内毒素检查。然而，高浓度的DMSO会干扰鲎试剂凝集反应，使用DMSO溶解难溶性注射剂粉末后，必须继续使用细菌内毒素检查用水稀释至16倍以上，才能有效排除DMSO引起的假阴性干扰。因此，DMSO稀释法不适用于一些最大有效稀释倍数低于16倍和用DMSO也难以有效溶解的难溶性注射剂细菌内毒素的检测。

由于鲎试剂与内毒素的反应需在水溶液中进行，只有样品完全溶解才能确保被样品颗粒包裹的内毒素完全释放。因此，对于难溶注射剂粉末细菌内毒素的检测，需要新的方法以弥补现存方法的缺陷，实现难溶注射剂粉末中细菌内毒素限度控制。

发明内容

为了克服难溶注射剂粉末不溶于细菌内毒素检查用水，导致难溶性注射剂细菌内毒素检测难度较大的问题，本发明提供一种新的难溶注射剂细菌内毒素检测方法，检测方法如下：将难溶注射剂粉末溶解在有机溶剂中，然后用细菌内毒素检查用水萃取有机相中的细菌内毒素，取水相溶液作为供试品溶液，采用凝胶法进行细菌内毒素检测。

所述有机溶剂与水不互溶；进一步所述有机溶剂为卤代烷烃、未取代烷烃、芳香烃、醚、酯或其两种及以上混合溶剂；更进一步所述有机溶剂为二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、正己烷、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、异丙醚、醋酸甲酯、醋酸乙酯或其两种及以上混合溶剂。

所述细菌内毒素检查用水的体积用量≤V，V＝m/c，m为难溶注射剂活性成分的质量，c为难溶注射剂活性成分最小有效稀释浓度，在高于最小有效稀释浓度下进行内毒素检测。

根据《中国药典》2015版，难溶注射剂最小有效稀释浓度c＝λ/L，λ为鲎试剂的标示灵敏度；L为供试品的细菌内毒素限值，L＝K/M。