[发明专利]鉴定甜瓜果实苦味性状的InDel分子标记5mBi3、其引物及应用

权利要求书

1.一种甜瓜果实苦味性状的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）利用CTAB法提取甜瓜叶片总DNA；

（2）利用核苷酸序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物对，以所述总DNA为模板，以甜瓜参考基因组v3.5.1为参照，PCR扩增位于5号染色体21653588bp处插入或缺失的序列为5’-TGTGTGTGTGTGTGTG-3’的Indel分子标记；

（3）对所述PCR扩增产物进行电泳、显影、染色和带型判读，根据扩增产物为286bp和/或270bp来判定待测甜瓜的基因和果实苦味的性状结果；其中，待测甜瓜在270bp有条带，表现为无苦味；在286bp有条带，表现为有苦味；在270bp和286bp均有条带，表现为有苦味；

所述甜瓜为由Primo×丰甜1号选系的C68、小翠瓜×广州蜜选系的C69、或由所述C68作为母本和所述C69作为父本获得的杂交后代。

2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，PCR扩增的体系为：

甜瓜叶片总DNA 1μL、核苷酸序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物各 1μL、2×Power Taq PCR MasterMix 12.5μL、ddH₂O 9.5μL。

3.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤（2）中，PCR扩增的反应程序为：

94℃ 5 min，35个循环的94℃ 20 s、55℃ 1 min、72℃ 30 s，72℃ 5 min。

4.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，在所述步骤（3）中，判读时，286bp的条带代表父本苦味特异基因型，270bp的条带代表母本不苦特异基因型。

5.核苷酸序列如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物在甜瓜果实苦味性状分子标记辅助育种中的应用，其特征在于，所述引物对的扩增产物在270bp有条带，甜瓜果实为无苦味；在286bp有条带，甜瓜果实为有苦味；在270bp和286bp均有条带，表现为有苦味；

所述甜瓜为由Primo×丰甜1号选系的C68、小翠瓜×广州蜜选系的C69、或由所述C68作为母本和所述C69作为父本获得的杂交后代。