[发明专利]鉴定甜瓜果实苦味性状的InDel分子标记5mBi3、其引物及应用有效
申请号: | 201911120741.2 | 申请日: | 2019-11-15 |
公开(公告)号: | CN110643735B | 公开(公告)日: | 2022-07-08 |
发明(设计)人: | 周丹;马双武;王吉明;尚建立;李娜;孔胜楠;李楠楠 | 申请(专利权)人: | 中国农业科学院郑州果树研究所 |
主分类号: | C12Q1/6895 | 分类号: | C12Q1/6895;C12N15/11 |
代理公司: | 郑州盈派知识产权代理事务所(普通合伙) 41196 | 代理人: | 张晓辉;樊羿 |
地址: | 450009 河南*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 鉴定 甜瓜 果实 苦味 性状 indel 分子 标记 mbi3 引物 应用 | ||
本发明公开了一种鉴定甜瓜果实苦味性状的InDel分子标记5mBi3、其引物及应用,旨在解决现有技术无法快速准确的对甜瓜果实苦味性状种群进行种质鉴定的技术问题。本发明筛选了一种鉴定甜瓜果实苦味性状的InDel分子标记,设计了一种所述InDel分子标记的引物,提供了一种鉴定甜瓜果实苦味性状的方法,并将所述的分子标记、所述引物或所述方法在甜瓜果实苦味性状分子标记辅助育种中应用。本发明的分子标记能够在苗期准确鉴定出甜瓜果实是否含有苦味,检测方便、准确性高,不受环境因素的影响,可为鉴定甜瓜果实苦味提供新手段,加速甜瓜苦味品种的改良进程,提高育种的准确性和选择效率。
技术领域
本发明涉及分子生物学技术领域,具体涉及一种鉴定甜瓜果实苦味性状的InDel分子标记5mBi3、其引物及应用。
背景技术
甜瓜(
随着高通量测序和分子标记技术的发展,全基因组重测序以及对序列信息的分析,使得分子标记辅助育种技术成为农作物遗传育种工作中应用最为广泛的技术之一。葫芦科作物无苦味品种的培育也成为研究的热点。Qi等(2013)将控制黄瓜果实苦味的候选基因定位在5号染色体442-kb的区域内;张圣平等(2011)通过对含有184个单株的黄瓜F2群体分析,获得了与Bt基因连锁距离为0.8cM的Indel标记Bt-InDel-1,进一步应用于无苦味黄瓜的分子标记辅助选择(MAS)育种及Bt基因精细定位。
InDel分子标记作为近年新兴的一种分子生物技术,以PCR扩增技术为基础,具有开发成本低、分型简单、检测简单便捷、扩增产物带型简单清晰、结果准确以及仪器设备要求低等优点。
然而,在甜瓜品种中,苦味基因的遗传研究及相关的分子标记选育工作相对较少。因此,亟需开发出与甜瓜果实苦味紧密连锁的分子标记,以期可以快速准确的对甜瓜果实苦味性状种群进行种质鉴定,为甜瓜果实无苦味品种的改良及选育奠定技术基础。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种鉴定甜瓜果实苦味性状的InDel分子标记5mBi3,并设计了其引物,以期能够快速准确的对甜瓜果实苦味性状种群进行种质鉴定和提高甜瓜育种的准确性和选择效率。
为解决上述技术问题,本发明采用如下技术方案:
筛选出一种甜瓜果实苦味性状的InDel分子标记,命名为5mBi3,位于甜瓜5号染色体20822407bp处,其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
设计得到上述InDel分子标记的引物,核苷酸序列如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示。
基于上述分子标记设计一种甜瓜果实苦味性状的鉴定方法,包括以下步骤:
(1)利用CTAB法提取甜瓜叶片总DNA;
(2)利用所述的引物对,以所述总DNA为模板进行PCR扩增;
(3)对所述PCR扩增产物进行电泳、显影、染色和带型判读,根据扩增产物的条带大小及位置关系确定所属基因型。
在所述步骤(2)中,PCR扩增的体系优选为:甜瓜叶片总DNA 1μL、所述引物各 1μL、2 ×Power Taq PCR MasterMix 12.5μL、ddH2O 9.5μL。
所述PCR扩增的反应程序为:94℃ 5 min,35个循环的94℃ 20 s、55℃ 1 min、72℃ 30 s,72℃ 5 min。
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