[发明专利]一种树莓酒降酸的实现方法

权利要求书

1.一种树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：包括：

(1)筛选能够酿酒的酵母菌单菌落；

(2)将筛选出的酵母菌相同菌种合并之后置于无菌水中活化制成酵母菌液；

(3)将树莓打成汁，首先测定树莓汁的pH、还原糖含量、总酸含量参数，然后进行分装，再接种步骤(2)所述酵母菌液，于25℃、100r/min摇床培养4天，利用高效液相色谱仪进行不同种类酸的含量测定，通过降酸量的对比，以筛选出能够降低酸度的降酸酵母菌种，利用筛选出的降酸酵母菌种作为发酵剂制备树莓酒，以达到有效降酸的效果；

所述步骤(1)筛选方法为树莓汁发酵醪中降酸菌种的筛选方法或树莓腐叶土中降酸菌种的筛选方法。

2.根据权利要求1所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述树莓汁发酵醪中降酸菌种的筛选方法，包括：

S1、将树莓加水打成浆后，将发酵罐放在30℃下自然发酵3-4天，得树莓发酵液；

S2、将部分树莓发酵液用两层纱布进行过滤，并进行梯度稀释，得稀释液；

S3、将剩余树莓发酵液和稀释液涂布在PDA固体培养基上，放入28℃生化培养箱中培养3天；

S4、选取100-200个菌落区间的平板进行计数，将每个菌落划线分离到PDA固体培养基上，并在28℃生化培养箱中培养3天；

S5、通过镜检，挑出酵母菌，记录酵母菌大小、形态、繁殖方式特征；

S6、将初步筛选出来的不同单菌落的酵母菌分别划线分离到WL固体培养基上，在生化培养箱中28℃培养5天，筛选出能够酿酒的酵母菌单菌落。

3.根据权利要求2所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述步骤S2中，将1/12-1/8体积的树莓发酵液用两层纱布进行过滤。

4.根据权利要求1所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述树莓腐叶土中降酸菌种的筛选方法，包括：

W1、将树莓种植基地腐叶土样品置于无菌水中，振荡摇动后再静置，然后用纱布加脱脂棉进行过滤，滤液即为分离样品；

W2、取分离样品接于PDA液体培养基中进行增菌和活化，然后再水浴中加热；

W3、将装有PDA液体培养基的三角瓶在30℃下振荡培养24小时，进行镜检计数；

W4、将PDA液体培养基再经一次热处理后，进行稀释并涂布于PDA固体培养基中；在生化培养箱中28℃培养3天，并用显微镜进行镜检，挑出酵母菌；

W5、酵母菌单菌落置入PDA液体培养基中活化并增菌，然后再进行倾注分离，并放在生化培养箱中28℃培养2天；

W6、将培养液涂布于WL培养基上，在生化培养箱中28℃培养5天，筛选出能够酿酒的酵母菌单菌落。

5.根据权利要求2或4所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述挑出酵母菌时的镜检过程为：将分离出来的不同菌落用美兰试剂染色制成载玻片后利用光学显微镜在400倍镜头下进行镜检。

6.根据权利要求2或4所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述能够酿酒的酵母菌单菌落的筛选过程为：通过观察经WL固体培养基培养的菌落形态和颜色特征，根据菌落的特征进行初步鉴定，然后经过观察菌落、单细胞以及WL培养基上菌落的形态、大小参数挑出能酿酒的酵母菌单菌落。

7.根据权利要求1所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述步骤(2)利用血球计数板进行酵母菌密度测定，从而得出酵母菌的接种量。

8.根据权利要求1所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述PDA固体培养基1000ml，由马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，氯霉素0.1g，蒸馏水1000ml配置而成；所述WL培养基1000ml，由酵母膏4g，胰蛋白胨5g，葡萄糖50g，磷酸二氢钾0.55g，氯化钾0.425g，氯化钙0.125g，硫酸镁0.125g，氯化铁0.0025g，硫酸锰0.0025g，琼脂20g，溴甲酚绿0.022g，氯霉素0.1g，蒸馏水1000ml配制而成；所述PDA液体培养基1000ml，由马铃薯200g，葡萄糖20g，氯霉素0.1g，蒸馏水1000ml配置而成。

9.根据权利要求1所述的树莓酒降酸的实现方法，其特征在于：所述高效液相色谱仪的色谱条件为：色谱柱：BDS HYPEREIL C18色谱柱(4.6mm×250mm，5um)；流速：0.8mL/min；柱温：室温；进样体积：20μL；检测波长：210nm；流动相：97％0.1mol/L磷酸氢二钾(用磷酸调节pH至2.05)，3％乙腈。