[发明专利]一种表达IL-6R阻断抗体的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及制备方法、应用

说明书

本发明属于基因工程和细胞生物学领域，涉及一种表达IL‑6R阻断抗体的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞及制备方法、应用。具体地，构建靶向CD19的嵌合抗原受体和IL‑6R阻断剂托珠单抗的双表达载体。通过慢病毒介导的方式将靶向CD19的嵌合抗原受体和IL‑6R阻断剂托珠单抗的双表达载体转导至T细胞。本发明提供的pHR‑antiCD19CAR‑Tocilizumab‑T细胞在不影响其表型，杀伤，细胞因子释放等方面的特性的情况下，通过基因工程技术使细胞自分泌IL‑6R阻断剂托珠单抗），控制CRS副作用的产生，增加安全性。

技术领域

本发明属于基因工程和细胞生物学技术领域，具体涉及一种表达IL-6R阻断抗体的靶向CD19的嵌合抗原受体T细胞（Chimeric Antigen Receptor T cell，CAR-T）及制备方法、应用。

背景技术

1989年，嵌合抗原受体改造T细胞（CAR-T）这一概念被首次提出，目的是建立肿瘤特异性识别能力的过继细胞疗法。第一代CAR的设计是简单的用特异性单克隆抗体来源的scFv（single-chain antibody variable region fragment）段替换TCR （T cellreceptor）的胞外区部分，保留了跨膜结构和胞内传递信号的CD3ζ区域，有的研究组胞内信号传递部分也会采用FcR。但第一代CAR的临床试验结果却非常令人失望，效果最好的一次临床试验也仅仅有2/11个病人有长期的缓解。随着对免疫学认识的不断深入，人们发现CD3ζ信号虽然能够诱导T细胞的活化和短暂增殖，但之后会诱导T细胞的无能（anergy）。1998年，有两个实验室报道了CD28信号结构域可以为CD3ζ信号提供辅助的共刺激功能。因此，第二代CAR的设计在第一代的基础上引入了共刺激分子的部分，如CD28或CD137（4-1BB）的胞内信号结构域。而第三代CAR则是加入了2个共刺激分子的功能信号结构域，包括CD27、CD28、4-1BB、ICOS或OX40(15-18)。现在在临床上进行实验的主要是第二代CAR的设计。

CAR-T的疗效已经被业内所公认，2017年8月30日，美国FDA批准了首个CAR-T药物——Kymriah（tisagenlecleucel），用于治疗复发或难治性(r/r)儿童和年轻成人B细胞急性淋巴细胞白血病。这是首个获批的免疫细胞药物。一个多月后的10月18日，FDA批准Kite制药Yescarta (axicabtagene ciloleucel，KTE-C10)，用于治疗对其他疗法无响应或者接受过至少2种治疗方案后复发的特定类型成人大B细胞淋巴瘤患者,包括弥漫性大B细胞淋巴瘤、转化型滤泡性淋巴瘤、原发纵隔B细胞淋巴瘤。Yescarta是FDA批准的第2款CAR-T疗法。