[发明专利]腺病毒和轮状病毒量子点联检试纸条及制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种腺病毒和轮状病毒抗原量子点联检试纸条及其制备方法和应用，所述试纸条包括底板，以及在所述底板上从左往右依次搭接的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上包被有被量子点标记的腺病毒检测抗体和被量子点标记的轮状病毒检测抗体。本发明试纸条以量子点作为示踪物，利用免疫层析技术和双抗体夹心原理，结合量子点的荧光特性，实现了采用量子点免疫层析的方法对腺病毒抗原、轮状病毒抗原进行灵敏、快速、特异、简便的联合检测，且应用范围广。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及腺病毒和轮状病毒量子点联检试纸条及制备方法和应用。

背景技术

人腺病毒(Human adenovirus，HAdV)是一种分布十分广泛的具有双螺旋DNA基因组的病毒，属腺病毒科。轮状病毒和腺病毒的混合感染最为常见，是一个不容忽视的问题。人轮状病毒(Human rotavirus，HRV)最早是在20世纪由Bishop在澳大利亚腹泻儿童的肠活检上皮细胞内发现，由于形状似车轮而得此名。根据抗原性的不同可将轮状病毒划分为A-G7个组，当前人们关注的重点仍是A组HRV引起的重症腹泻，是造成发展中国家5岁以下婴幼儿腹泻死亡的主要原因，在幼儿病毒感染中，腺病毒仅次于轮状病毒。

目前，腹泻相关病毒的实验室检测方法主要包括:电镜法、病毒分离培养法，免疫学和分子生物学检测。其中电镜观察、细胞培养等检测方法由于操作复杂，耗时长，已不能满足要求；PCR技术检测相对费时费力，自动化检测仪器昂贵，不适合单人份和较小批量检测用，因此限制了它们在基层医院、诊所的应用。近年来出现了胶体金免疫层析法来联合检测腺病毒和轮状病毒，快速，便捷，单人份操作，但是胶体金试条检测样品只能定性，不能定量，且灵敏度低。因此，发展一种快速，敏感和精确的方法来同时检测腺状病毒和轮状病毒迫在眉睫。

量子点(quantum dot)是在把激子在三个空间方向上束缚住的半导体纳米结构。量子点的制造方法可以大致分为三类：化学溶液生长法，外延生长法，电场约束法。量子点的激发光谱较宽，可用一种激发波长激发多种不同发射波长的量子点；荧光半峰宽比较窄，可以减少不同荧光发射光谱之间的重叠，降低它们之间的干扰；目前，已出现了将量子点作为生物荧光标记，应用于活细胞体系的标记检测等技术，掀起了量子点的研究热潮。量子点免疫层析技术利用层析和荧光检测的原理，通过制成条状结构，可随时随地随身携带，对样品进行检测，在紫外线灯光或专用设备照射激发后，出现肉眼可见的反应条带，具有结构简单、灵敏度高、检测快速以及使用方便等的特点。

目前，尚未见基于量子点标记联合检测腺病毒抗原和轮状病毒抗原的相关产品。

发明内容

本发明旨在提供一种腺病毒和轮状病毒量子点联检试纸条及制备方法和应用。该试纸条能够实现对腺病毒和轮状病毒的同时快速、准确的检测，且经过改进，灵敏度和稳定性更高。

为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：一种腺病毒和轮状病毒抗原量子点联检试纸条，包括底板，以及在所述底板上从左往右依次搭接的样本垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述结合垫上包被有被量子点标记的腺病毒检测抗体和被量子点标记的轮状病毒检测抗体。

进一步地，所述量子点为羧基水溶性量子点或聚乙二醇功能化水溶性量子点，粒径12nm-18nm，最大发射波长在600-630nm，激发波长450nm。

进一步地，所述被量子点标记的腺病毒检测抗体和被量子点标记的轮状病毒检测抗体采用量子点复溶液稀释后再按一定比例混合后包被到结合垫上。

进一步地，所述量子点复溶液为含有松二糖2-15wt％、吐温-60 0.01-0.15wt％、氨基乙酸0.1-1.5wt％、庆大霉素0.5-2.5wt％和ProClin 200 0.02-0.15v％的磷酸盐缓冲液，该磷酸盐缓冲液浓度为0.01M，pH为7.2。

进一步地，所述样本垫经样本垫处理液处理后，烘干制得。