[发明专利]一种用于检测甘胆酸的纳米酶联免疫吸附分析方法在审
| 申请号： | 201911125727.1 | 申请日： | 2019-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN110927378A | 公开（公告）日： | 2020-03-27 |
| 发明（设计）人： | 何绮怡;赵肃清;方岩雄;杨慧怡;崔锡平;陈莹珊 | 申请（专利权）人： | 广东工业大学 |
| 主分类号： | G01N33/577 | 分类号： | G01N33/577;G01N33/53 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 陈嘉毅 |
| 地址： | 510060 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 检测 胆酸 纳米 免疫 吸附 分析 方法 | ||
1.一种用于检测甘胆酸的纳米酶联免疫吸附分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.普鲁士蓝纳米立方体的合成：采用PVP作为稳定剂，一锅法得到普鲁士蓝纳米立方体；
S2.普鲁士蓝纳米立方体-单克隆抗体的偶联：调整普鲁士蓝纳米立方体，通过静电作用结合单克隆抗体；
S3.棋盘模拟酶联免疫分析方法确定包被浓度与抗体用量：改变包被GCA-OVA的浓度，改变抗体偶联的稀释比例，确定包被浓度与抗体用量；
S4.甘胆酸标准曲线的确定：以甘胆酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得到甘胆酸标准曲线。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1所述普鲁士蓝纳米立方体的合成的具体步骤为：将PVP与普鲁士蓝溶解在HCl中，均匀搅拌后，放置于烘箱中反应10～30小时，冷却，离心后取沉淀，即得所述普鲁士蓝纳米立方体。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述HCl的物质的量浓度为0.005～0.015M。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S2所述普鲁士蓝纳米立方体-单克隆抗体的偶联的具体步骤为：取普鲁士蓝纳米立方体溶液，加入K2CO3和腹水进行反应后，再加入BSA溶液进行反应，离心后取沉淀，即得所述普鲁士蓝纳米立方体-单克隆抗体的偶联。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述BSA溶液的浓度为0.05～0.15mg/mL。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述K2CO3的物质的量浓度为0.1～0.3M。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S3所述棋盘模拟酶联免疫分析方法确定包被浓度与抗体用量的具体步骤为：分别包被GCA-OVA包被抗原，温浴后加入脱脂奶粉，随后加入普鲁士蓝纳米立方体-单克隆抗体进行反应，确定包被浓度与抗体用量。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述GCA-OVA的浓度为1.25～10μg/mL。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述普鲁士蓝纳米立方体和单克隆抗体的稀释比为1:20～1:1280。
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