[发明专利]一种用于检测甘胆酸的纳米酶联免疫吸附分析方法

说明书

本发明公开了一种用于检测甘胆酸的纳米酶联免疫吸附分析方法。该方法包括以下步骤：S1.普鲁士蓝纳米立方体的合成：采用PVP作为稳定剂，一锅法得到普鲁士蓝纳米立方体；S2.普鲁士蓝纳米立方体‑单克隆抗体的偶联：调整普鲁士蓝纳米立方体，通过静电作用结合单克隆抗体；S3.棋盘模拟酶联免疫分析方法确定包被浓度与抗体用量：改变包被GCA‑OVA的浓度，改变抗体偶联的稀释比例，确定包被浓度与抗体用量；S4.甘胆酸标准曲线的确定：以甘胆酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得到甘胆酸标准曲线。该方法特异性高，灵敏度好，在检测尿液中的甘胆酸方面具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明属于免疫检测技术领域。更具体地，涉及一种用于检测甘胆酸的纳米酶联免疫吸附分析方法。

背景技术

肝细胞受损并积累引起肝脏疾病，检测肝细胞受损程度并对肝功能进行实时评价，对于早期诊断、预防和治疗肝脏疾病具有重要意义。甘胆酸是胆汁酸的主要成分之一，由胆固醇与肝内的甘氨酸结合而成，其含量的测定对肝病诊断较具敏感性，是评价肝脏功能的一项很重要的指标。相关研究指出，胆汁酸经肾脏排泄很明显，并与肝胆疾病程度相关；因此，检测尿液中的甘胆酸对临床有一定指导价值。但是，临床上检测甘胆酸多取静脉血，而针对一些小儿患者、不便于取静脉血的患者，检测其尿液中的甘胆酸有着便利性与对疾病诊断的指导意义。

辣根过氧化物酶，作为目前免疫分析方法中最常用的信号指示酶，被广泛地应用于ELISA的定量检测。随着科技的发展，具有类酶活性的纳米材料也逐渐展现了它们优异的性能，例如，可人工合成，不受温度和酸碱度的影响，稳定性好等。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服在尿液中检测甘胆酸的技术空白，提供一种普鲁士蓝纳米立方体用于模拟酶联免疫分析方法，即一种用于检测甘胆酸的纳米酶联免疫吸附分析方法。

本发明的目的是提供一种普鲁士蓝纳米立方体用于模拟酶联免疫分析方法。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明提供了一种普鲁士蓝纳米立方体用于模拟酶联免疫分析方法，包括以下步骤：

S1.普鲁士蓝纳米立方体的合成：采用聚乙烯吡咯烷酮(PVP)作为稳定剂，一锅法得到普鲁士蓝纳米立方体；

S2.普鲁士蓝纳米立方体-单克隆抗体的偶联：调整普鲁士蓝纳米立方体，通过静电作用结合单克隆抗体；

S3.棋盘模拟酶联免疫分析方法确定包被浓度与抗体用量：改变包被GCA-OVA的浓度，改变抗体偶联的稀释比例，确定包被浓度与抗体用量；

S4.甘胆酸标准曲线的确定：以甘胆酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，得到甘胆酸标准曲线。

优选地，步骤S1所述普鲁士蓝纳米立方体的合成的具体步骤为：将PVP与普鲁士蓝溶解在HCl中，均匀搅拌后，放置于烘箱中反应10～30小时，冷却，离心后取沉淀，即得所述普鲁士蓝纳米立方体。

更优选地，所述HCl的物质的量浓度为0.005～0.015M。

更进一步优选地，所述HCl的物质的量浓度为0.01M。

优选地，步骤S2所述普鲁士蓝纳米立方体-单克隆抗体的偶联的具体步骤为：取普鲁士蓝纳米立方体溶液，加入K₂CO₃和腹水进行反应后，再加入BSA溶液进行反应，离心后取沉淀，即得所述普鲁士蓝纳米立方体-单克隆抗体的偶联。

更优选地，所述BSA溶液的浓度为0.05～0.15mg/mL。

更进一步优选地，所述BSA溶液的浓度为0.1mg/mL。

更优选地，所述K₂CO₃的物质的量浓度为0.1～0.3M。