[发明专利]一种短命植物新疆小拟南芥的遗传转化方法

权利要求书

1.一种小拟南芥的遗传转化方法，包括以小拟南芥叶柄作为外植体进行遗传转化的步骤。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步骤：

1)采用含有目的基因表达载体的农杆菌侵染液侵染小拟南芥叶柄，将侵染后的小拟南芥叶柄在共生培养基中进行共生培养，得到共生培养后的叶柄；

2)将所述共生培养后的叶柄在筛选培养基中进行继代培养，得到不定芽；

3)将所述不定芽在生根培养基中进行生根培养，得到完整的小拟南芥转基因植株。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤1)中，所述侵染液的OD₆₀₀为0.6，所述侵染的时间为10min。

4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述共生培养基包括0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的萘乙酸和20mg/L的乙酰丁香酮；

或，所述筛选培养基包括0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的萘乙酸、10mg/L的筛选剂和500mg/L的抑菌剂；

或，所述生根培养基包括0.1mg/L的萘乙酸、10mg/L的筛选剂和500mg/L的抑菌剂。

5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于：

所述共生培养基的pH为5.7-5.9，具体为5.8；

或，所述筛选培养基的pH为5.7-5.9，具体为5.8；

或，所述生根培养基的pH为5.7-5.9，具体为5.8；

或，所述筛选剂为潮霉素B；

或，所述抑菌剂为羧苄青霉素。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于：

步骤1)中，所述培养条件为无菌、22℃、黑暗条件下培养24h；

或，步骤2)中，所述培养条件为无菌、22℃、16h光照/8h黑暗条件下培养至得到至少含有4片叶子的不定芽；培养过程中每周更换一次筛选培养基；

或，步骤3)中，所述培养条件为无菌、22℃、16h光照/8h黑暗条件下培养2个月。

7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于：所述叶柄的长度为0.8-1.2cm。

8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于：步骤1)还包括如下步骤：将侵染后的小拟南芥叶柄表面多余的菌液用无菌滤纸吸干，然后置于共生培养基中进行共生培养。

9.用于小拟南芥遗传转化的试剂盒，其包括权利要求1-8中任一所述的共生培养基和/或筛选培养基和/或生根培养基。

10.权利要求9所述的试剂盒在小拟南芥遗传转化中的应用；

或，权利要求9所述的试剂盒在制备小拟南芥遗传转化的产品中的应用；

或，权利要求1-8任一所述的方法或权利要求9所述的试剂盒在小拟南芥育种中的应用。