[发明专利]一种短命植物新疆小拟南芥的遗传转化方法

说明书

本发明公开了一种短命植物新疆小拟南芥的遗传转化方法。所述遗传转化方法包括如下步骤：1)采用含有目的基因表达载体的农杆菌侵染液侵染小拟南芥叶柄，将侵染后的小拟南芥叶柄在共生培养基中进行培养，得到共生培养后的叶柄；2)将所述共生培养后的叶柄在筛选培养基中进行培养，得到不定芽；3)将所述不定芽在生根培养基中进行培养，得到完整的小拟南芥转基因植株。本发明成功建立了以小拟南芥叶柄作为外植体通过根癌农杆菌介导的小拟南芥遗传转化方法，该遗传转化方法的建立可为后续研究小拟南芥重要基因的功能奠定基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种短命植物新疆小拟南芥的遗传转化方法。

背景技术

新疆小拟南芥(Arabidopsis pumila)是一种典型的早春短命植物，广泛分布于新疆极端环境。《新疆植物志》第2卷和《中国植物志》第33卷中，命名为小鼠耳芥，俗称为小拟南芥。小拟南芥是模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)近缘物种，同拟南芥相比，小拟南芥具有更强的光合效率和更大的结实量，更耐盐。因此小拟南芥是研究植物与环境相适应机制的较好材料。

本发明申请人前期主要从小拟南芥应答盐胁迫基因表达水平方面开展研究，克隆得到了多个耐盐相关基因，但是由于没有建立小拟南芥的遗传转化体系，基因转化主要转化到模式植物拟南芥上，因而限制了基因功能的深入研究。因此为了更好的解析小拟南芥耐盐机制，探索这一物种的重要基因功能，建立小拟南芥的遗传转化体系尤为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种小拟南芥的遗传转化方法。

本发明提供的小拟南芥的遗传转化方法，包括以小拟南芥叶柄作为外植体进行遗传转化的步骤。

上述方法可包括如下步骤：

1)采用含有目的基因表达载体的农杆菌侵染液侵染小拟南芥叶柄，将侵染后的小拟南芥叶柄在共生培养基中进行共生培养，得到共生培养后的叶柄；

2)将所述共生培养后的叶柄在筛选培养基中进行继代培养，得到不定芽；

3)将所述不定芽在生根培养基中进行生根培养，得到完整的小拟南芥转基因植株。

上述方法中，步骤1)中，所述侵染液的OD₆₀₀为0.6，所述侵染的时间为10min。

上述方法中，所述共生培养基包括0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的萘乙酸和20mg/L的乙酰丁香酮；

所述筛选培养基包括0.5mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的萘乙酸、10mg/L的筛选剂和500mg/L的抑菌剂；

所述生根培养基包括0.1mg/L的萘乙酸、10mg/L的筛选剂和500mg/L的抑菌剂。

进一步的，所述筛选剂可为潮霉素B；所述抑菌剂可为羧苄青霉素。

更进一步的，所述共生培养基的pH可为5.7-5.9，具体可为5.8；

所述筛选培养基的pH可为5.7-5.9，具体可为5.8；

所述生根培养基的pH可为5.7-5.9，具体可为5.8。

在本发明的具体实施例中，

所述共生培养基由MS固体培养基、6-苄氨基腺嘌呤、萘乙酸和乙酰丁香酮组成；

所述筛选培养基由MS固体培养基、6苄氨基腺嘌呤、萘乙酸、潮霉素B和羧苄青霉素组成；

所述生根培养基由MS固体培养基、萘乙酸、潮霉素B和羧苄青霉素组成。