[发明专利]3位氟甲基取代的香豆素类化合物的制备方法及荧光探针

说明书

本发明提供了一类3位氟甲基取代的香豆素类化合物的制备方法及香豆素类自锚定酶检测荧光探针。具体的，本发明的制备方法为在Eosin Y与氧化剂、碱金属盐、碱土金属盐等同时存在下，通过一步法在香豆素3位引入含氟甲基，本发明的方法反应条件温和，操作简单，选择性高，产率高，且重现性好。本发明还提供了一类具有强自锚定能力和高荧光强度的香豆素类自锚定荧光探针。

技术领域

本发明涉及荧光探针领域，具体涉及一类3位氟甲基取代的香豆素类化合物的制备方法及香豆素类自锚定酶检测荧光探针。

背景技术

小分子荧光探针因其具有背景信号低、灵敏度高、结果直观、安全无创、便捷经济、等特点被实际应用于荧光成像、流式细胞分析、高通量筛选、环境监测等领域；而且被广泛以用于酶的检测、体内示踪、药物的研发、疾病的诊断和外科手术的指导等众多生物医学相关领域的研究中。然而普通小分子荧光探针在被目标酶激活后易于从检测位点扩散出去甚至排出细胞外，从而使荧光信号变弱，这就降低了荧光探针检测的灵敏性和分辨率。

自锚定荧光探针能被酶特异性识别、水解而产生荧光，并能与周边蛋白形成共价标记，不易扩散和排出，从而能增加荧光探针检测的灵敏性和实用性。

所以，需要提供更多具有强自锚定能力和高荧光强度的荧光探针及反应条件温和，产率高的制备方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种只需一步反应即可在香豆素3位引入氟甲基，且反应条件温和，选择性高，产率高的3位氟甲基取代的的香豆素类化合物的制备方法。

本发明的另一目的是提供一类具有强自锚定能力和高荧光强度的香豆素类自锚定酶检测荧光探针。

本发明第一方面，提供了一种式I化合物的制备方法，包括步骤：

(a)在惰性溶剂中，在Eosin Y和添加剂存在下，式II化合物与式III化合物在蓝光光照下发生反应，得式I化合物，

其中，

A选自下组：CH₂F或CHF₂；

X选自下组：O、NH或S；

R选自下组：H或酶识别基团；

所述酶识别基团为能够被酶识别并与所述酶的靶向识别基团相互作用，从而产生-XH的基团；

R¹、R²、R³、R⁴各自独立地选自：氢、卤素、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6烯基、取代或未取代的C1-C6炔基、取代或未取代的C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、取代或未取代的C6-C10芳基、C6-C10卤代芳基，或取代或未取代的C3-C10环烷基；

如未特别说明，所述“取代”是指基团上的一个或多个氢被选自下组的基团取代：H、-OH、-NH₂、卤素、氧代(＝O)、C1-C6烷基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C3烷氧基、C1-C3卤代烷基、-COOH、苯基或苄基；

M为配对阳离子；

且所述添加剂选自下组：氧化剂、碱金属盐、碱土金属盐，或其组合。

在另一优选例中，所述卤素选自下组：氟、氯、溴或碘。

在另一优选例中，M为Na⁺或K⁺。

在另一优选例中，所述式II化合物在加保护基团后进行步骤(a)。

在另一优选例中，所述保护基团选自下组：Boc、Cbz或Fmoc。