[发明专利]一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法

说明书

本发明公开了一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法，包括以下步骤：(1)采用乙腈对样品进行前处理；(2)离子色谱测定前处理所得样品中各种还原性单糖的浓度；(3)显色后，紫外‑可见光谱测定各种还原性单糖在562nm的摩尔吸光系数及待测样品在该波长的总吸光度值；(4)基于上述步骤测定的参数值，同时以牛血清蛋白作为花生蛋白的参考标准品，扣除还原性单糖对562nm波长处总吸光度值的贡献，计算得到前处理所得样品中水溶性花生蛋白质的浓度。本发明排除了样品中不同还原性单糖对水溶性花生蛋白质浓度测定的干扰，实验结果可知，由还原性单糖造成水溶性花生蛋白质浓度的偏高率达到22％～50％。

技术领域

本发明属于化学检测技术领域，具体涉及一种含有还原性单糖的溶液中水溶性花生蛋白质浓度的测定方法。

背景技术

花生是我国产食用油的六大重要原料之一。目前，我国花生的年产量居世界首位，占全球花生总产量的40％以上。除用于食用、出口及作物种子外，每年大约有50～60％的花生用于制备食用油。花生经压榨产油后的剩余物称之为花生粕，其年产量已达到300万吨以上。除碳水化合物和少量脂肪类物质外，花生粕中蛋白质的含量高达50％以上。经有效提取、纯化和精制后，花生蛋白可直接作为淀粉类和肉类制品的天然添加剂，提升食品的营养价值；经蛋白酶水解、分离纯化和精制后，除产生人体所需的8种必需氨基酸外，还可产生多种活性多肽物质，具备增强人体免疫力的显著功效。

水溶性蛋白是花生蛋白质中最易提取和利用的蛋白质。为增加水溶性花生蛋白质的提取率，通常采用生物酶(如半纤维素酶、纤维素酶和脂肪酶等)水解花生粕中的聚糖和寡糖，增加花生粕的可及性。然而，酶法辅助提取技术所产生的提取液成分较为复杂，除水溶性蛋白纯化和精制技术较为缺乏外，现有蛋白质浓度测定方法涉及步骤繁琐或准确度低的缺陷，导致对水溶性花生蛋白自身酶水解、分离纯化和精制的价值也难以准确评价，大部分花生粕或其提取物直接作为鱼类和家禽的饲料添加剂，显著影响我国水溶性花生蛋白的高值化转化和利用，造成资源的严重浪费。

前期，研究者主要采用凯氏定氮法测定花生粕提取液中水溶性蛋白的浓度(李晓刚,张永丹.花生粕的酶解新工艺研究[J].食品工业科技,2004,25(2):102-103.)。但该方法涉及浓硫酸消化样品、氨的蒸馏及盐酸滴定等繁琐的操作步骤，且分析滴定人为操作误差较大，影响测定的准确性。此外，尽管部分研究者采用BCA试剂测定血清(周祖钊,朱文雅,彭小玲,等.BCA法测定微量蛋白质的初步评价[J].临床检验杂志,1992(3):134-135.)、蜂蜜(邹泽红.BCA法测定蜜蜂变应原中的蛋白含量[J].化学分析计量,2004,13(05):000052-53.)及酶制剂(尚雁,李娜,覃小焕,等.介孔分子筛SBA-15的脂肪酶固定量分析测定[J].分析化学,2009,37(8):1173-1177.)中蛋白质的浓度，但还原性单糖可与BCA试剂发生显色反应，增大特定波长下的吸光度值，影响检测的准确性。