[发明专利]对免疫细胞进行细胞数、活力或凋亡测定的高精密度方法在审
| 申请号： | 201911135469.5 | 申请日： | 2019-11-19 |
| 公开（公告）号： | CN112903634A | 公开（公告）日： | 2021-06-04 |
| 发明（设计）人： | 郭美锦;高围;庄英萍;储炬;陈睿 | 申请（专利权）人： | 华东理工大学;上海睿钰生物科技有限公司 |
| 主分类号： | G01N21/64 | 分类号： | G01N21/64;G01N15/14 |
| 代理公司： | 上海专利商标事务所有限公司 31100 | 代理人： | 陈静 |
| 地址： | 200237 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 免疫 细胞 进行 活力 测定 精密度 方法 | ||
1.一种对免疫细胞进行细胞数、活力或凋亡测定的方法，包括：利用Rigel荧光分析仪进行测定，其中，
测定免疫细胞的细胞数或活力时，以吖啶橙和碘化丙啶混合染料进行染色；
测定免疫细胞的凋亡时，以异硫氰酸荧光素和氨基放线菌素D混合染料进行染色。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的免疫细胞包括：
外周血单个核细胞，或
来自于外周血单个核细胞的细胞。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述来自于外周血单个核细胞的细胞包括：淋巴细胞，单核细胞，NK细胞。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的淋巴细胞包括：T细胞，B细胞。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的淋巴细胞为携带有嵌合抗原受体的重组细胞，如CAR-T细胞。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，吖啶橙和碘化丙啶混合染料中，AO:PI为0.8～1.2:0.8～1.2；较佳地为1:1。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，异硫氰酸荧光素和7-氨基放线菌素D混合染料中，按照体积比，异硫氰酸荧光素和7-氨基放线菌素D的比例为1.5:4。
8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，测定时，Rigel荧光分析仪的明场、FL1、FL2增益设置为2.5～3.5、3～4、3～4；较佳地为2.8～3.2、3.3～3.7、3.3～3.7；更佳地为3、3.5、3.5。
9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，测定时，Rigel荧光分析仪的曝光时间设置为200～300ms、7000～9000ms、7000～9000ms；较佳地为280～320ms、7600～8400ms、7800～8200ms；更佳地为250ms、8000ms、8000ms。
10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫细胞的浓度为：1×104～1×107个细胞/ml。
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