[发明专利]基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法

权利要求书

1.一种基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于包括选种育苗、培植取样、前处理、烘干、烟碱分析、基因检测、烟株筛选、培植取种步骤，具体步骤如下：

A、选种育苗：从不同烟碱转化率的朱砂烟种子库里选择种子进行育苗；

B、培植取样：从出苗开始待烟株生长30～40d且生长至30～40cm高度后，选取烟株底部第2至第4片叶中状态良好的烟叶作为取样叶片；

C、前处理：将取样的烟叶置于乙烯利与脱落酸的混合溶液中浸润后，采用打孔法采集鲜烟叶样品用于基因表达检测，将剩余烟叶干燥至表面没有游离的水分；

D、烘干：将经前处理的表面无水分烟叶在50～60℃条件下烘干至恒重后保存；

E、烟碱分析：用气相色谱仪分析烘干至恒重后烟叶的烟碱和降烟碱含量，计算烟碱转化为降烟碱的烟碱转化率T；

基因检测：检测经前处理后的打孔烟叶样品中CYP82E4基因表达水平；

烟株筛选：根据烟碱转化率T和CYP82E4基因的表达情况，筛选出所需烟碱定量转化率的烟株继续培植，同时去掉培植地块中转化率不符合要求的烟株；

培植取种：将筛选出的烟株严格单株套袋防止异花授粉，待成熟留种后即可得到所需定量烟碱转化率的烤烟朱砂烟种子。

2.根据权利要求1所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述A步骤中预筛选的种子烟碱目标转化率为T～T+15%时，从种子库里选择的种子烟碱转化率为T-15%～T。

3.根据权利要求2所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述A步骤中的朱砂烟种子库包括云烟97-朱砂烟种子库、云烟87-朱砂烟种子库。

4.根据权利要求2所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述B步骤中选取烟株底部第2至第4片叶中状态良好且长度22～28cm的烟叶作为取样叶片。

5.根据权利要求2所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述B步骤中在取样前5～10d停止施肥，在取样前10～20d停止施氮肥。

6.根据权利要求5所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述C步骤中取样后的烟叶置于1.0～1.5g/L的乙烯利和3～7mg/L的脱落酸等体积混合溶液中浸润5～15s。

7.根据权利要求6所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述C步骤中经采集用于基因表达检测的烟叶样品的剩余烟叶置于30～40℃的烘箱中烘干至表面没有游离的水分。

8.根据权利要求1至7任意一项所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述E步骤中烟碱转化率T为：

T=降烟碱/(烟碱+降烟碱+其他微量碱)×100%。

9.根据权利要求7所述基于烟碱定量转化率和基因表达筛选朱砂烟种子的方法，其特征在于所述F步骤中采用荧光定量PCR技术检测经前处理后的烟叶CYP82E4基因表达水平。