[发明专利]一种SUMO-CP融合蛋白及其制备方法以及其多克隆抗体的制备方法

权利要求书

1.一种SUMO-CP融合蛋白的制备方法，包括以下步骤：

1)根据对虾肝胰腺细小病毒衣壳蛋白CP的核苷酸序列设计正、反向引物，并进行PCR扩增，所得PCR产物与pSUMO 载体分别酶切并连接，转化大肠杆菌DH5α，筛选阳性工程菌并提取质粒做双酶切及DNA测序验证，构建得到pSUMO-sHPVCP重组质粒；其中，所述对虾肝胰腺细小病毒衣壳蛋白CP的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示，所述的正向引物和反向引物分别如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示；

2)将构建的pSUMO-sHPVCP重组质粒转染大肠杆菌Rossetta (DE3)，得到诱导表达蛋白的菌液；

3)所得诱导表达蛋白的菌液离心，沉淀经裂解破碎后再离心，收集沉淀，得到SUMO-CP融合蛋白包涵体；对所得SUMO-CP融合蛋白包涵体进行溶解、透析后，上Ni²⁺亲和层析柱纯化，得到纯化后的SUMO-CP融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：步骤是3)中，所述的Ni²⁺亲和层析柱为Ni-IDA -Sepharose Cl-6B亲和层析柱。

3.根据权利要求1或2所述制备方法制备得到的SUMO-CP融合蛋白，该融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

4.抗对虾肝胰腺细小病毒-CP多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

Ⅰ)将SUMO蛋白与琼脂糖介质偶联制备成抗原亲和纯化层析柱，备用；

Ⅱ)选取合适的动物，以权利要求3所述的SUMO-CP融合蛋白为免疫原对其进行皮下免疫注射，直至动物的特异性抗血清滴度达标；

Ⅲ)采集动物的抗血清，过Ⅰ)制得的抗原亲和纯化层析柱，用甘氨酸缓冲液洗脱，得到纯化后的抗对虾肝胰腺细小病毒-CP多克隆抗体。