[发明专利]一种活化的嗜碱性粒细胞的表达谱及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种活化的嗜碱性粒细胞的转录组表达谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)嗜碱性粒细胞的制备、活化和培养，其中，嗜碱性粒细胞的活化采用Anti-IgE刺激；

2)抽提步骤1)活化后的嗜碱性粒细胞细胞总RNA，进行全转录组测序，得到Anti-IgE组细胞mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA测序数据；

3)全转录组表达谱的鉴定：采集未活化的嗜碱性粒细胞mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA原始数据，使用Agilent GeneSpring GX v12.1软件进行芯片标准化，建立Control组与步骤2)所得Anti-IgE组细胞mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA表达谱；

对比Control组与Anti-IgE组RNAs的标准化值，以差异倍数变化、P-value为差异筛选阈值，筛选出差异表达的RNAs，即得所述活化的嗜碱性粒细胞的转录组表达谱。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中采用负选的方法从正常人抗凝的外周血中制备嗜碱性粒细胞。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中，采用无血清培养基于37℃含5％的CO₂培养箱中培养活化后的嗜碱性粒细胞12～48小时。

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤1)中Anti-IgE的浓度为10μg/mL。

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤3)中，mRNA相应的差异倍数变化为大于或等于2。

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤3)中，lncRNA相应的差异倍数变化为大于或等于3。

7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤3)中，circRNA相应的差异倍数变化为大于或等于1.5。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤3)中，microRNA相应的差异倍数变化为大于或等于50。