[发明专利]一种活化的嗜碱性粒细胞的表达谱及其构建方法和应用

说明书

本发明公开了一种活化的嗜碱性粒细胞的转录组表达谱的构建方法，包括嗜碱性粒细胞的制备、活化和培养，抽提细胞总RNA，全转录组测序以及全转录组表达谱的鉴定。本发明还公开了活化的嗜碱性粒细胞的转录组表达谱，与未经活化的人嗜碱性粒细胞的转录组表达谱相比，mRNA中有6个显著上调，lncRNA中有10个显著上调，circRNA中有6个显著上调，microRNA中有8个显著上调。本发明通过系统研究人嗜碱性粒细胞活化相关转录组学表达谱的变化，鉴定了多个活化后差异表达的RNA，这些RNA为抑制人嗜碱性粒细胞的活化提供了新的靶标，进而为过敏性疾病和自身免疫性疾病的治疗提供了新的方向。

技术领域

本发明涉及转录组技术领域，尤其是一种活化的嗜碱性粒细胞的转录组表达谱及其构建方法和应用。

背景技术

嗜碱性粒细胞(Basophils)是外周血白细胞中一种，主要由骨髓CD34⁺的造血祖细胞分化而来。嗜碱性粒细胞数量增多常见于某些过敏性疾病、血液病、肿瘤等；嗜碱性粒细胞数量减少常见于Ⅰ型超敏反应(速发型变态反应)，如荨麻疹、过敏性休克等。目前，普遍认为嗜碱性粒细胞是过敏性疾病的主要效应细胞之一，在哮喘等过敏性疾病中有重要作用。

活化是嗜碱性粒细胞发挥其生物学功能的关键步骤。在不同疾病状态下，体内IgE抗体升高，与嗜碱性粒细胞表面表达的IgE高亲和力受体FcεRI结合，激活嗜碱性粒细胞。此外，FcεRI介导的活化途径是最主要的途径之一，也是目前报道最广泛的活化途径。具体地，嗜碱性粒细胞表面表达的IgE高亲和力受体FcεRI与IgE-抗原复合物交联，可激活一系列信号通路，包括信号分子Fyn、Syk、Lyn、PI3k和Akt等，释放大量组胺、白三烯、细胞因子(IL-4/6/13等)和交感分子(CD40/40L、CD62L、CD80/CD86等)，从而参与疾病的发生发展。近年来，越来越多的研究表明嗜碱性粒细胞活化也参与免疫调节，并且在许多疾病中被鉴定，目前更多的报道集中在类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)及系统性红斑狼疮(Systemic lupus erythematosus,SLE)。

嗜碱性粒细胞活化释放的IL-4、IL-13等Th2类细胞因子、趋化因子等，启动变应原特异性Th2免疫应答，从而参与自身免疫性疾病(SLE和RA)的免疫调节。据报道，嗜碱性粒细胞在RA和SLE患者病例及小鼠模型中异常活化且与疾病活动有关：活化的嗜碱性粒细胞可通过影响Th1/Th2平衡参与RA的发展，也可促使B细胞分化成熟为浆细胞并与IL-3协同作用增强抗体产生；此外，嗜碱性粒细胞的异常活化也可通过促进Th17分化和诱导自身抗体产生加剧SLE。目前，尚未有嗜碱性粒细胞活化相关转录组学表达谱鉴定的相关报道。

发明内容

基于上述问题，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种活化的嗜碱性粒细胞的转录组表达谱及其构建方法，通过靶向所构建的表达谱中差异表达的RNA，为抑制嗜碱性粒细胞的活化提供了新的靶标，从而为过敏性疾病和自身免疫性疾病的治疗提供了新的思路。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案包括以下几个方面：

在第一个方面，本发明提供了一种活化的嗜碱性粒细胞的转录组表达谱的构建方法，包括如下步骤：

1)嗜碱性粒细胞的制备、活化和培养，其中，嗜碱性粒细胞的活化采用Anti-IgE刺激；

2)抽提步骤1)活化后的嗜碱性粒细胞细胞总RNA，进行全转录组测序，得到Anti-IgE组细胞mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA测序数据；

3)全转录组表达谱的鉴定：采集未活化的嗜碱性粒细胞mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA原始数据，使用Agilent GeneSpring GX v12.1软件进行芯片标准化，建立Control组与步骤2)所得Anti-IgE组细胞mRNA、lncRNA、circRNA、microRNA表达谱；