[发明专利]一种测定气-液界面暴露下卷烟烟气细胞毒性的方法

权利要求书

1.一种测定气-液界面暴露下卷烟烟气细胞毒性的方法，其特征在于，将气-液界面暴露法和噻唑蓝法联合起来对卷烟烟气导致的细胞毒性进行检测，

在进行所述气-液界面暴露法时，将细胞以0.8～1.2*10⁶个/孔的密度接种于插入式培养板；以流速为8～12mL/min的烟气对细胞进行染毒处理。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在进行所述染毒处理时，烟气出口与插入式培养板通透膜的距离为1.4～1.6mm。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，抽吸模式为ISO 3308:2012抽吸模式或加拿大深度抽吸模式；优选为ISO 3308:2012抽吸模式；

优选当所述抽吸模式为ISO 3308:2012抽吸模式时，暴露时间为0.5～1.5h；更优选为1h。

4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述细胞为小鼠单核巨噬细胞RAW264.7。

5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述插入式培养板为24mm插入式培养板。

6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其特征在于，在细胞培养时，下室加入1.8～2.2mL生长培养液，上室加入1.4～1.6mL生长培养液；

优选细胞培养24h后再对其进行染毒处理。

7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其特征在于，在进行所述噻唑蓝法时，MTT溶液的浓度为0.45～0.55mg/mL，优选为0.5mg/mL；

优选所述噻唑蓝法的具体操作包括：在插入式培养板上室加入0.8～1.2mL 0.45～0.55mg/mL的MTT溶液，在5％CO₂、37℃下孵育2.5～3.5h；

优选孵育结束后，去除所述插入式培养板上室中的MTT溶液，加入0.8～1.2mL二甲亚砜，轻轻振荡4～6min。

8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其特征在于，每次试验均设置洁净空气暴露腔室，通入洁净空气，作为空气对照组；设置烟气暴露腔室，通入烟气，作为暴露组；并在吸光度检测时设置二甲亚砜作为空白组；

细胞存活率＝(暴露组吸光度-空白组吸光度)/(空气对照组吸光度-空白组吸光度)*100％。