[发明专利]目标生物分子的锚定方法、膨胀显微成像方法及其应用

权利要求书

1.一种目标生物分子的锚定方法，其特征在于，所述锚定方法包括：

通过对目标生物分子进行标记，使所述目标生物分子带上氨基基团和信号标记；

利用所述氨基基团将所述目标生物分子锚定到凝胶中；

其中，利用所述氨基基团将所述目标生物分子锚定到凝胶中包括：

通过丙烯酰胺活性酯或者戊二醛与所述氨基基团进行反应的方式，将所述目标生物分子锚定到凝胶中。

2.根据权利要求1所述的锚定方法，其特征在于，通过生物正交反应对所述目标生物分子进行标记使所述目标生物分子带上所述氨基基团和所述信号标记。

3.根据权利要求2所述的锚定方法，其特征在于，

采用带有生物正交基团的代谢类似物或经过生物正交基团修饰的有机化学分子与带有互补生物正交基团的第一标记分子，通过所述生物正交基团之间进行所述生物正交反应，使所述目标生物分子带上所述第一标记分子；

利用带有氨基基团和信号标记的第二标记分子特异性结合所述第一标记分子，从而使所述目标生物分子带上所述氨基基团和所述信号标记。

4.根据权利要求3所述的锚定方法，其特征在于，

所述生物正交基团为叠氮或端炔基；所述第一标记分子为生物素、地高辛、FLAG或二硝基苯；相应地，所述带有氨基基团和信号标记的第二标记分子为带有信号标记的链霉亲和素、地高辛抗体、FLAG抗体或二硝基苯抗体。

5.根据权利要求1所述的锚定方法，其特征在于，通过带有氨基基团的第三标记分子标记所述目标生物分子，使所述目标生物分子带上所述氨基基团和所述信号标记。

6.根据权利要求5所述的锚定方法，其特征在于，

所述目标生物分子为脂质或核酸或糖类，相应地，所述第三标记分子为脂溶性染料、核酸染料或荧光标记的适配体、或者带荧光标记的凝集素。

7.根据权利要求1所述的锚定方法，其特征在于，

通过带有氨基基团的第四标记分子标记所述目标生物分子，使所述目标生物分子带上所述氨基基团和所述第四标记分子；

将带有信号标记的第五标记分子与所述第四标记分子进行特异性结合，从而使所述目标生物分子带上所述氨基基团和所述信号标记。

8.根据权利要求7所述的锚定方法，其特征在于，

所述第四标记分子为一抗，相应地，所述第五标记分子为荧光标记的二抗。

9.根据权利要求1所述的锚定方法，其特征在于，采用邻近标记的方法使所述目标生物分子修饰上生物素，并利用带有氨基基团和荧光标记的生物素结合物与所述生物素结合，使所述目标生物分子带上所述氨基基团和所述信号标记，其中，所述生物素结合物为生物素亲和素或生物素抗体。

10.根据权利要求9所述的锚定方法，其特征在于，

所述邻近标记的方法为APEX，BirA或TurboID。

11.根据权利要求9所述的锚定方法，其特征在于，

所述生物素亲和素为链霉亲和素。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的锚定方法，其特征在于，在使所述目标生物分子带上所述氨基基团和所述信号标记之后，以及利用所述氨基基团将所述目标生物分子锚定到凝胶中之前，所述锚定方法还包括对所述信号标记进行放大的步骤。

13.根据权利要求4或9-11中任一项所述的锚定方法，其特征在于，采用生物素三聚体连接两个链霉亲和素，并通过逐轮生物素-链霉亲和素相互作用的迭代染色锚定方法来实现对所述信号标记进行放大；或者通过isHCR的锚定方法实现对所述信号标记进行放大。