[发明专利]一种蝴蝶兰花梗茎段快速繁殖方法

权利要求书

1.一种蝴蝶兰花梗茎段快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）培养基的配制：

a. 先称取相应重量份的冬瓜皮13.5~14.5份、西瓜皮8.5~9.5份、苋菜梗5.5~6.5份、黄瓜皮11~12份，南瓜藤13~14份共同置于木筛子上，然后在木筛子下面进行蒸汽熏蒸，熏蒸32~38min后，取出混合原料备用；

b. 将操作a中熏蒸处理后的混合原料置于深冷式粉碎机中进行粉碎处理，粉碎处理24~28min后，过50~70目筛备用；

c. 先将操作b中过筛后的粉末和无菌水按照重量体积比为1g:4.2~4.8mL共同投入微射流高压均质机内，然后进行均质处理，均质处理11~13min后，用3~5层纱布进行过滤，得滤液和滤饼备用；

d. 称取相应重量份的操作c所得滤液210~290份、柠檬酸2.2~2.8份、微量元素1.2~1.8份、6-苄基氨基嘌呤0.65~0.75份、萘乙酸0.32~0.38份、粉末添加剂3.2~3.8份、琼脂粉7.5~8.5份、纯化水510~590份备用；

e. 先将操作d中所称取的所有原料共同投入搅拌罐内，以42~48℃/min的速度将搅拌罐内的温度升至98~100℃，在升温的过程中以620~680rpm的转速进行搅拌直至原料中的琼脂粉完全融化，然后停止搅拌，将搅拌罐内的温度升至122~128℃，压力升至3.2~3.8MPa，维温维压21~23min，再降温降压，待压力降至常压，温度降至72~78℃时，取出产物趁热分装即得培养基备用；

（2）外植体的制备：

a. 先选取花朵凋谢，花期已过，生长健壮的蝴蝶兰花梗，然后将选取的花梗切成4~6cm的茎段；

b. 先将操作a中所得的蝴蝶兰花梗茎段投入杀菌液中进行浸泡，在浸泡的同时进行搅拌，浸泡处理15~19min后，用无菌水冲洗蝴蝶兰花梗茎段直至将表面的杀菌液冲洗干净，然后用无菌吸水纸将所得花梗茎段表面的无菌水吸干备用；

c. 将操作b中所得的无菌茎段的两端以及表面切除，然后将剩余的茎段部分切成0.7~1cm的小段即得外植体备用；

（3）接种：

将步骤（2）中所得的外植体接种到步骤（1）所得的培养基中，接种量每50mL培养基中接种4~6个外植体；

（4）接种后管理：

将步骤（3）中接种后的培养基置于光照培养箱中进行培养，培养过程中保持培养箱中的空气相对湿度为50~60%，温度为25~27℃，期间利用可调节光谱的LED光源控制光照条件。

2.根据权利要求1所述一种蝴蝶兰花梗茎段快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤（1）操作a中的冬瓜皮、西瓜皮、苋菜梗、黄瓜皮，南瓜藤均是新鲜采摘的。

3.根据权利要求1所述一种蝴蝶兰花梗茎段快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤（1）操作a中蒸汽的制备方法是：先称取相应重量份的小杭菊5.5~6.5份、金银花2.2~2.8份、金丝桃5.2~5.8份、艾草2.2~2.8份、雷公藤1.2~1.8份投入320~380份去离子水中，大火煮至沸腾，然后改用中火进行加热，边加热边缓慢匀速滴加无水乙醇，采用32~38min后冒出的蒸汽作为步骤（1）操作a中熏蒸处理的蒸汽，其中无水乙醇的滴加量为去离子水的10~20%。

4.根据权利要求1所述一种蝴蝶兰花梗茎段快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤（1）操作b中粉碎处理时粉碎机内的温度控制为-30~-20℃，粉碎机的转速为1250~1350rpm。

5.根据权利要求1所述一种蝴蝶兰花梗茎段快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤（1）操作c中均质处理时，微射流高压均质机的工作压力为145~155MPa。

6.根据权利要求1所述一种蝴蝶兰花梗茎段快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤（1）操作d中微量元素中各成分及对应重量份为：硼酸0.0022~0.0028份、硫酸锰0.00012~0.00018份、硫酸锌0.0032~0.0038份、钼酸钠0.00022~0.00028份、硫酸铜0.000012~0.000018份、氯化钴0.000023~0.000025份。