[发明专利]一种米拉贝隆有关物质的HPLC分析方法

说明书

本发明公开了一种米拉贝隆有关物质的HPLC分析方法。本发明的分析方法包括选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；采用流动相梯度洗脱，流动相的组成为磷酸二氢钾缓冲液、甲醇及乙腈；在适当流速和柱温下进行高效液相色谱分析，记录色谱图。本发明能有效的洗脱、分离和定量米拉贝隆原料药中的杂质，使杂质峰与主峰完全分离，分析速度快，检测效果好。

技术领域

本发明属于芳乙醇胺类β3受体激动剂药物分析技术领域，特别是涉及一种米拉贝隆有关物质的HPLC分析方法。

背景技术

米拉贝隆((R)-2-(2-氨基-1,3-噻唑-4-基)-4'-[2-[(2-羟基-2-苯乙基)氨基]乙基]苯乙酰胺)属于芳乙醇胺类β3受体激动剂，作用于膀胱逼尿平滑肌β3肾上腺素受体，使膀胱舒张，促进膀胱充盈并增加储尿量，能有效减少排尿次数，改善膀胱活动过度引起的尿频、尿急和尿失禁等。米拉贝隆为膀胱过度活动症患者提供了新的治疗方案，其片剂服用方便，服用剂量小，药效显著，能明显减轻膀胱过度活动症患者的痛苦，为广大患者带来福音。

米拉贝隆有关物质测定中，常见的杂质分别为八种，包括2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酸、(R)-2-羟基-N-[[(2-(4-氨基苯基)乙基]氨基]-1-苯基乙醇一盐酸盐、2-[2-[2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酰胺]噻唑-4-基]乙酸盐酸盐、2-(2-氨基噻唑-4-基)-N-[[4-(2-苯基乙基氨基)乙基]苯基]乙酰胺盐酸盐、(R)-2-{2-[2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酰胺]噻唑-4-基}-N-{4-[2-(2-羟基-2-苯基乙基氨基)乙基]苯基}乙酰胺盐酸盐、N-[2-(4-氨基-苯基)-乙基]-2-(2-氨基-噻唑-4-基)-N-(2-羟基-2-苯基-乙基)-乙酰胺、(R)-2-{2-[2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酰胺]噻唑-4-基}-N-(4-{2-[[2-(2-氨基-噻唑-4-基)-乙酰基]-(2-羟基-2-苯基-乙基)-氨基]-乙基}-苯基)-乙酰胺和(R)-2-{2-[2-(2-氨基噻唑-4-基)乙酰胺]噻唑-4-基}-N-(4-{2-[[2-(2-氨基噻唑-4-基)-乙酰基]-(2-羟基-2-苯乙基)氨基]乙基}苯基)-乙酰胺。

目前，已有的米拉贝隆有关物质HPLC检测方法，如“米拉贝隆有关物质的HPLC法测定”，《药物分析杂志》，2016年；以及“HPLC法测定米拉贝隆原料药中有关物质”，《天津药学》，2017年。虽然上述方法均对米拉贝隆原料药中存在的杂质进行了检测，但检测不全面，且上述方法均采用了离子对试剂作为洗脱剂，易对杂质检测产生干扰。

因此，寻找一种简单可行，能将米拉贝隆及其存在的八种杂质依次洗脱且分离，并做定量分析的方法势在必行。

发明内容

本发明的目的在于提供一种米拉贝隆有关物质的HPLC分析方法。本发明利用梯度洗脱的高效液相色谱法，实现了有效的洗脱、分离和定量米拉贝隆原料药中的杂质，使杂质峰与主峰完全分离，分析速度快，检测效果好。

为了达到上述的目的，本发明采取以下技术方案：

一种米拉贝隆有关物质的HPLC分析方法，其中，

(1)所述米拉贝隆(M)及其有关物质(A-H)的化学结构式如下：

(2)所述HPLC分析方法的主要参数：

a、色谱柱选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；

b、流动相梯度洗脱，其中：

流动相由流动相A和流动相B组成，其中，所述流动相A为磷酸二氢钾缓冲液和甲醇的混合溶液，所述流动相A中磷酸二氢钾缓冲液的浓度为0.01mol/L～0.05mol/L，pH为4.0～6.5，甲醇占比为5％～20％；所述流动相B为乙腈；

梯度洗脱时间与流动相比例如下：