[发明专利]细胞治疗剂用于缓解或改善血管病变的方法

说明书

本发明涉及CD34阳性细胞的细胞治疗剂用于缓解或改善血管病变的方法。一方面，涉及的细胞治疗组合物包括CD34⁺细胞和可药用载体，例如，其中包含：CD34⁺细胞、氯化钠、注射用水，其中CD34⁺细胞的密度为1×10⁶个/mL～5×10⁶个/mL，氯化钠的质量体积百分数为0.8％～1.0％或0.9％。还涉及该包含CD34阳性细胞的细胞治疗剂的制备方法，以及所述细胞治疗组合物在制备用于缓解或改善血管病变的药物中的用途，其中所述血管病变为肢体动脉狭窄闭塞或糖尿病引起的外周动脉病变；优选肢体动脉狭窄闭塞或糖尿病引起的下肢动脉病变。本发明的方法呈现如本发明所述优良技术效果。

技术领域

本发明属于生物医药领域，尤其涉及采用细胞生物学技术治疗临床疾病的领域。具体而言，本发明涉及一种以脐带源间充质干细胞为起始材料来制备CD34⁺细胞的方法，还涉及以该种细胞制备得到的细胞治疗组合物，本发明的细胞治疗组合物可以用于缓解或改善血管病变，例如肢体动脉狭窄闭塞或糖尿病引起的外周动脉病变；尤其是肢体动脉狭窄闭塞或糖尿病引起的下肢动脉病变。

背景技术

干细胞介导再生和遗传信息至后来细胞世代的传递。它们可自我更新和产生分化的后代。近年来，在我们对干细胞与它们的组织微生态环境之间的相互作用背后的分子机制的理解中已取得了进步。这已导致对在干细胞中起作用的分子调控机制有了更好的理解。

虽然基因疗法仍然是试验性方法，但该技术有希望对人健康产生重大影响。在过去数年中，基因疗法的范围和定义已发生了变化并且得到扩展。除了矫治遗传的遗传性障碍例如囊性纤维化、血友病和其他疾病外，基因治疗法还已发展至抵抗获得性疾病例如癌症、AIDS、慢性血管局部缺血、骨关节炎、糖尿病、帕金森病和阿尔茨海默病。

目前，种系基因疗法由于其复杂技术性质和伦理考虑而未被涉及。然而，只对单个个体有益的(不能代代相传的)体细胞基因疗法是干细胞研究的主要焦点。从至鼠类造血干细胞内的成功基因转移的最初描述至先天患有x-连锁联合免疫缺陷(SCID)和腺苷脱氨酶缺陷(ADA)-缺陷的患者中的第一例明确成功的临床试验花费了15年以上的时间。干细胞疗法的许多方面正在研究中。例如，逆转录病毒载体在许多情况下已被用于将基因转移入干细胞中以修复突变的或不完善的基因。此类情况包括严重联合免疫缺陷、范可尼贫血和其他血红蛋白病。

干细胞工程的中心议题是用于将治疗性基因导入祖细胞的特殊方法学。因为逆转录病毒倾向于插入活性基因(据认为凝缩的染色质在这些区域是打开的)，有人提出，它们的使用还可能增加癌症的风险，因为逆转录病毒载体插入参与细胞增殖的基因附近在理论上可产生前体癌干细胞。然而，该类型事件的总体风险难以确定。现在有许多在慢性肉芽肿病(CGD)患者中取得完全成功的实例，其中NADPH氧化酶的活性在输注经遗传改变的血液干细胞后得到恢复。

富有成效的基因疗法的最低要求是在矫治生物学背景中治疗性基因产物的持续产生，同时有害副作用最小。为了达到该目的，基因疗法中干细胞的应用将需要发展调节治疗性基因表达的新策略以及用于将外源基因有效递送至干细胞的方法。通过在确定的组织环境中分化干细胞来选择性控制治疗性基因的表达是干细胞工程的重要目标。该方法可以例如帮助控制干细胞分化成特定的谱系、维持它们的未分化状态以待日后移植、增殖，以及调控治疗性基因例如自杀基因、细胞因子或生长因子在确定的组织环境中的表达。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)来源于发育早期的中胚层和外胚层，具有多向分化潜能、免疫调节和自我复制等特点，日益受到人们的关注。间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复，尤其对治疗衰老和组织器官损伤修复有很大的临床应用价值。