[发明专利]一种胶原蛋白黑素细胞复合物、制备方法及应用

权利要求书

1.一种胶原蛋白黑素细胞复合物的制备方法，其特征在于，它先制备交联的胶原蛋白海绵支架材料，在交联的胶原蛋白海绵支架材料上接种黑素细胞，然后进行体外培养而获得。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于制备交联的胶原蛋白海绵支架材料的方法包括以下步骤：将合适大小的胶原蛋白加入反应溶剂中，加入交联剂，磁力搅拌；反应结束后，清洗，冷冻干燥，灭菌。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述胶原蛋白是水产动物胶原蛋白或是哺乳动物胶原蛋白；胶原蛋白厚度为0.5-10mm的海绵，剪成不大于培养皿的形状；反应溶剂为乙醇或水相，优选90％乙醇或pH＝5.5的PBS溶液；交联剂采用EDC和NHS，交联剂EDC：NHS的摩尔比为1:1-1:4之间；磁力搅拌时间为2-72h，优选24-48h；反应温度为4-30℃，优选反应温度为20-25℃；清洗条件为磷酸盐缓冲液浸泡1-2h，纯化水清洗1-24h。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于在交联的胶原蛋白海绵支架材料上接种黑素细胞、进行体外培养包括以下步骤：预铺胶原蛋白海绵支架材料到细胞培养板中，取100μl-1000μl黑素细胞按2*10⁴-2*10⁷个/ml的密度接种在胶原蛋白海绵支架材料上，置于细胞培养箱37℃、5％CO₂、饱和湿度条件下培养；接种黑素细胞的胶原蛋白支架培养30min-2h后，补充细胞培养基1ml-10ml，继续置于细胞培养箱37℃、5％CO₂、饱和湿度条件下培养；铺有胶原蛋白海绵支架材料的培养板每两天换一次细胞培养基，培养时间为1-25天，即可获得黑素细胞-胶原蛋白复合物。

5.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于黑素细胞为人的黑素细胞；所述人的黑素细胞为自体或异体组织提取的黑素细胞。

6.根据权利要求1或4所述的制备方法，其特征在于，通过调节接种细胞的密度、数量或培养的时间实现肤色调节。

7.一种胶原蛋白黑素细胞复合物，其特征在于其为采用权利要求1-6任一种方法制备的原蛋白支架与黑素细胞复合物。

8.权利要求7所述的胶原蛋白黑素细胞复合物的应用，其特征在于用于制备治疗色素缺失患者及表皮层损伤的生物材料。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于在构建胶原蛋白黑素细胞复合物时，通过调节接种细胞的密度、数量或培养的时间实现肤色调节。