[发明专利]一种基于多腺嘌呤和多信号系统的电化学传感检测体系及其应用

权利要求书

1.一种dsRNA电化学传感检测体系，其特征在于，所述检测体系包括金电极，所述金电极表面修饰有捕获探针；

所述捕获探针包括靶标dsRNA的5’端互补序列和多腺嘌呤尾；

所述检测体系还包括至少一条信号探针，所述信号探针包括靶标dsRNA互补链的一段序列；

所述信号探针的3’端标记有生物素；

所述检测体系还包括至少一条间隔序列，所述间隔序列包括靶标dsRNA互补链的一段序列。

2.根据权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述捕获探针的多腺嘌呤尾包括20～40个碱基A；

所述dsRNA的长度大于500nt。

3.根据权利要求2所述的检测体系，其特征在于，所述dsRNA的长度大于1000nt。

4.一种dsRNA电化学传感器，其特征在于，所述传感器包括如权利要求1-3任一项所述的检测体系。

5.一种dsRNA电化学检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求1-3任一项所述的检测体系。

6.根据权利要求5所述的dsRNA电化学检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括DMSO，所述DMSO的浓度为2％～40％；

所述试剂盒还包括亲和素标记HRP、TMB或H₂O₂中的任意一种或至少两种的组合。

7.根据权利要求6所述的dsRNA电化学检测试剂盒，其特征在于，所述DMSO的浓度为6％～20％。

8.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述捕获探针包括如SEQ ID NO:1～4所示的核酸序列；

所述信号探针包括如SEQ ID NO:5～21所示的核酸序列；

所述间隔序列包括如SEQ ID NO:22～23所示的核酸序列。

9.一种dsRNA检测方法，其特征在于，所述检测方法采用如权利要求1-3任一项所述的检测体系、如权利要求4所述的传感器或如权利要求5-8任一项所述的试剂盒进行dsRNA检测。

10.根据权利要求9所述的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：

(1)将靶标dsRNA与生物素标记探针和间隔序列共同孵育高温变性，加入DMSO帮助打开dsRNA的二级结构，并阻止dsRNA二级结构的再次形成；

(2)解链的dsRNA、生物素标记信号探针和间隔序列与修饰有捕获探针的金电极进行杂交反应，在金电极上形成夹心结构；

(3)向步骤(2)获得的杂交产物中加入亲和素标记HRP，孵育；

(4)加入TMB和H₂O₂，进行电化学检测。

11.根据权利要求10所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述DMSO的浓度为2％～40％；

步骤(1)所述高温变性的温度为90～95℃；

步骤(2)所述杂交反应的温度为20～60℃；

步骤(2)所述捕获探针包括如SEQ ID NO:1～4所示的核酸序列；

步骤(2)所述信号探针包括如SEQ ID NO:5～21所示的核酸序列；

步骤(2)所述间隔序列包括如SEQ ID NO:22～23所示的核酸序列。

12.根据权利要求11所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述DMSO的浓度为6％～20％；

步骤(2)所述杂交反应的温度为50～55℃。

13.一种如权利要求1-3任一项所述的检测体系、如权利要求4所述的传感器或如权利要求5-8任一项所述的试剂盒在制备基于RNAi的转基因作物毒性检测试剂中的应用。