[发明专利]一种氯胺酮抗原的制备方法

说明书

本发明公开了一种氯胺酮抗原的制备方法，它包括以下步骤：S1，以盐酸氯胺酮为原料，将氨基用2‑三甲基甲硅烷基乙氧基羰酰氯（TeocCl）进行保护；S2，将氨基保护后的氯胺酮用硼氢化钠还原环已烷上的羰基成醇；S3，将步骤b)得到的醇与丁二酸酐反应引出含羧基的偶联臂；S4，将步骤c)得到的产物与大分子蛋白偶联，脱去氨基保护后得到氯胺酮抗原。本发明具有以下有益效果：本发明合成的抗原保留了氯胺酮分子中的仲胺活性基团，从分子结构中的环已烷引出偶联臂，最大程度保留了氯胺酮分子结构，所得抗原有较强的特异性和较高的灵敏度。

技术领域

本发明涉及生物化工技术领域，尤其涉及一种氯胺酮抗原的制备方法。

背景技术

氯胺酮(Ketamine，KET)是苯环已哌啶衍生物，属于第二类精神管制药品。其结构式如下式：

氯胺酮是一种静脉给药的短效麻醉剂，在亚麻醉剂量时就能产生深度镇痛的作用，且没有抑制心脏、呼吸功能的副作用，已经在临床上使用多年。同时氯胺酮具有中枢兴奋、致幻等作用。近年来，在美国、欧洲和亚洲流行于舞厅等娱乐场所，被青少年吸食，追求幻觉、做梦感、漂浮感和精神极度兴奋的感觉，其滥用现象非常严重。氯胺酮所致的不良反应包括:抽搐、惊厥、呼吸抑制、支气管痉挛、恶心、呕吐、胃出血、休克，暂时性失眠等。

氯胺酮及其代谢物的常用检测分析方法主要有:气相色谱法(GC)、气-质联用法(GC-MS)、高效液相色谱法(HPLC)、液-质联用法(LC-MS)、高效毛细管电泳法(HPCE)、酶联免疫吸附法(ELISA)等。

仪器分析方法具有极高的灵敏度和精密度，但需要昂贵的仪器、设备和经过专门培训的技术人员，不适于批量样品的筛选检测和现场即时检测。

近年发展起来的免疫检测法具有操作简便、高效、灵敏、适合大规模检测等优点，已被广泛应用于各类毒品的检测。要建立氯胺酮的免疫检测方法，必须获得具有抗原活性的氯胺酮全抗原。

发明内容

一种氯胺酮抗原的制备方法，将氯胺酮小分子通过化学方法连接到生物大分子上形成具有抗原活性的氯胺酮全抗原，它包括以下步骤：

S1，以盐酸氯胺酮为原料，将氨基用2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰酰氯(TeocCl)进行保护；

S2，将氨基保护后的氯胺酮用硼氢化钠还原环已烷上的羰基成醇；

S3，将步骤b)得到的醇与丁二酸酐反应引出含羧基的偶联臂；

S4，将步骤c)得到的产物与大分子蛋白偶联，脱去氨基保护后得到氯胺酮抗原。

在采用以上技术方案的基础上，本发明还可以采用以下进一步方案：

在步骤S1中，具体步骤为：

S101，先将100mg盐酸氯胺酮溶于10mL水，用1N氢氧化钠溶液将pH值调成8－9；

S102，加入50mL乙酸乙酯萃取，萃取后，将有机层用10ml水洗一次，并用无水硫酸钠干燥，减压浓缩溶剂，得到82mg氯胺酮Ⅰ；

S103，将82mg氯胺酮Ⅰ溶于4mL乙腈或二氯甲烷或N,N-二甲基甲酰胺，加入90mg咪唑或三乙胺，降至0℃，加入108mg 2-三甲基甲硅烷基乙氧基羰酰氯(TeocCl)，0-30℃反应2-24h；

S104，停止反应后，加入50mL饱和碳酸氢钠溶液，室温搅拌10min，用250mL乙酸乙酯萃取，有机层用50mL水洗两次，将有机层用无水硫酸钠干燥，减压浓缩得139mg粗品Ⅱ。