[发明专利]一种双重标记荧光微球的制备方法

权利要求书

1.一种双重标记荧光微球的制备方法，其特征在于，包括：

将苯乙烯放入带机械搅拌器的三口瓶中，然后加入水，加热搅拌；水浴升温至大于等于70℃时，加入过硫酸铵溶液，继续搅拌反应，得到均一的白色乳液即为聚苯乙烯微球；将聚苯乙烯微球离心收集，超纯水清洗并超声重悬水中。

将领苯二甲酸正丁酯与的十二烷基磺酸钠水溶液混合，超声至均匀乳液，将聚苯乙烯种子微球置于乳液中在水浴中搅拌溶胀；然后把含有苯乙烯、二乙烯基苯、可聚合染料单体苏丹红Ⅰ的乳液加到种子悬浮液中，搅拌溶胀；混合液搅拌升温，加入过硫酸铵溶液，聚合，产物通过离心收集并用乙醇和水清洗。

在聚苯乙烯微球乳液中加入十二烷基磺酸钠水溶液，称取铕配合物，溶于苯乙烯中，并加入聚苯乙烯微球悬浮液；超声乳化后，避光机械搅拌；升温，加入过硫酸铵进行聚合反应；反应一段时间后，补加苯乙烯和甲基丙烯酸，继续反应，结束反应后离心收集产物，洗涤，即为羧基荧光微球；加入甲基丙烯酸，微球表面被羧基化，使微球能与生物分子偶联；以及

取聚苯乙烯微球悬浮液加入NaOH溶液中和微球表面羧基，使其pH大于10，在磁力搅拌下用HCl溶液返滴定，直到样品的pH为3结束，计算微球表面羧基含量。

2.根据权利要求1所述的双重标记荧光微球的制备方法，其特征在于，将1～50mL苯乙烯放入带机械搅拌器的500mL三口瓶中，然后加入100～300mL水，通入氮气加热搅拌；水浴升温至75℃时，加入过硫酸铵溶液，继续搅拌反应20h，得到均一的白色乳液即为聚苯乙烯微球。

3.根据权利要求1所述的双重标记荧光微球的制备方法，其特征在于，将领苯二甲酸正丁酯与0.25％的十二烷基磺酸钠水溶液混合，超声至均匀乳液，将聚苯乙烯种子微球置于乳液中在20℃～40℃水浴中搅拌溶胀24h。

4.根据权利要求1或3所述的双重标记荧光微球的制备方法，其特征在于，把含有苯乙烯、二乙烯基苯、可聚合染料单体苏丹红Ⅰ的乳液加到种子悬浮液中，搅拌溶胀24h。

5.根据权利要求1或3所述的双重标记荧光微球的制备方法，其特征在于，混合液在氮气保护下搅拌升温至75℃，温度稳定后，加入过硫酸铵溶液，聚合24h，产物通过离心收集并用乙醇和水清洗。

6.根据权利要求1所述的双重标记荧光微球的制备方法，其特征在于，在浓度为20mg/mL的聚苯乙烯微球乳液中加入十二烷基磺酸钠水溶液，使其终浓度为0.25％。