[发明专利]一种活性寡肽的制备方法

说明书

本发明提供了一种寡肽的制备方法：将蛋白质溶液预酶解；再进行首次过滤：将预酶解液泵入超滤设备1，酶解后获得透过液1；透过液1进入超滤设备2，加入复合蛋白酶II酶解后获得透过液2；透过液2进行纳滤，获得透过液3和流出液，收集流出液（含寡肽的溶液），透过液3流回至超滤设备1；然后重复循环：持续向超滤设备1补充蛋白质溶液的溶剂，持续获得透过液1、透过液2、透过液3和流出液；流出液中寡肽浓度小于设定阈值，再次泵入预酶解液。本发明的制备方法，通过两种复合蛋白酶和串联式超滤偶联酶解，控制了蛋白和多肽的水解程度，最大程度提取寡肽，提高原料利用率。该制备方法步骤简单，获得的产品寡肽含量高、收率高，适于工业化生产。

技术领域

本发明属于寡肽制备领域，涉及一种抗氧化寡肽的制备方法，具体涉及一种以大米蛋白为原料制备抗氧化寡肽的方法。

背景技术

我国稻米资源丰富，产量居世界首位。大米蛋白中氨基酸组成平衡，配比合理，接近FAO/WHO推荐的理想模式。大米蛋白经蛋白酶水解成短肽或氨基酸后，可以制成营养价值更高的多肽产品，而进一步用于保健品、饮料、调味品、化妆品等行业。稻谷在加工生产过程中产生约15%的碎米，碎米的蛋白含量接近8%，其营养价值与大米相近，但价格仅为大米的1/3-1/2。目前碎米大多用于米粉、饲料、酿酒、味精生产等，附加值较低。通过碎米生产高品质的大米蛋白产品，或者进一步通过大米蛋白生产附加值更高的活性多肽产品，不仅会提高碎米的综合利用水平，同时也将会大大提高企业的经济效益。

目前，以碎米为原料制备生物活性肽的发明较多，其中CN 102229643 A以大米或碎米为原料，在碱提酸沉方法制备大米蛋白粗品的基础上，通过由淀粉酶、纤维素酶和脂肪酶组成的高效复合酶的除杂作用去除其中的非蛋白类物质，制备蛋白含量高于90％的高纯度大米蛋白，并进一步在此基础上通过复合蛋白酶作用和交替式酶解超滤偶联技术，控制大米蛋白的水解程度，分离制备得到蛋白含量高于90％、多肽含量高于70％、200-1200Da寡肽含量高于50％的蛋白高纯度大米肽。CN 101253925 A以大米为原料，经粉碎、碱溶酸沉、离心分离、上清液等电点沉淀、沉淀洗涤、加水匀质后再经中性蛋白酶水解、离心分离、上清液经冷冻干燥得到了分子量分布范围在392-1367Da，具有抗氧化活性的大米蛋白肽。CN102876762 A将碎米超微粉碎，加水及碳酸氢钠调配并发生酶解反应，固液分离后制备大米淀粉及大米蛋白。CN 109880874 A中将大米蛋白粉、水和复合蛋白酶混合后水解，得到水解物；将水解物依次进行压滤、陶瓷膜过滤、纳滤，得到小分子蛋白肽溶液，干燥，得到大米活性肽。CN 105349607 A将酶解过程和多级超滤串联同步连续酶解制备甘露醇聚肽，获得魔芋飞粉甘露醇聚肽的提取率达2-3%，纯度达70-75%。

可见，现有技术中虽然获得的寡肽纯度最高能够达到70%左右，但是酶解控制过程差，或者多肽含量高、需要反复酶解、步骤繁琐、成本高，或者酶解过度、氨基酸含量高，导致最终得率低。

发明内容

针对目前寡肽制备过程中酶解控制差、寡肽得率低的问题，本发明提供一种抗氧化寡肽的制备方法，能够控制酶解过程，获得的产品寡肽含量高、收率高，步骤简便，获得的寡肽抗氧化活性好。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种寡肽的制备方法，包括以下步骤：

（1）将蛋白质溶液与复合蛋白酶I混合后在酶解反应器中预酶解，获得预酶解液；

（2）首次过滤：将预酶解液泵入超滤设备1，酶解一段时间后开启超滤设备1，获得透过液1；

透过液1进入超滤设备2至一定量，加入复合蛋白酶II，酶解一段时间后开启超滤设备2，获得透过液2；

透过液2进入纳滤设备进行纳滤，获得透过液3和流出液，收集流出液，流出液即含寡肽的溶液，透过液3流回至超滤设备1；