[发明专利]蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途

权利要求书

1.蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途，

其中，所述外泌体包括来自于健康蜕膜组织中的CD56^brightCD16^-CD49a⁺的蜕膜NK细胞来源外泌体、CD56^brightCD16^-CD49a⁺CD39⁺蜕膜NK细胞来源外泌体、CD56^brightCD16^-CD49a⁺CD27⁺蜕膜NK细胞来源外泌体、CD56^brightCD16^-CD49a⁺CD160⁺蜕膜NK细胞来源外泌体、CD56^brightCD16^-CD49a⁺TIGIT⁺蜕膜NK细胞来源外泌体、和CD56^brightCD16^-CD49a⁺CD39⁺TIGIT⁺蜕膜NK细胞来源外泌体中的任意一种或多种，

所述不孕不育相关疾病治疗药物为治疗子宫内膜损伤的药物或治疗母胎免疫耐受障碍相关性疾病的药物；

所述辅助治疗剂为提高受精卵正常发育率的试剂组合物。

2.根据权利要求1所述的蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途，其特征在于：

其中，所述治疗子宫内膜损伤的药物为促进子宫内膜厚度增加的药物、增强子宫内膜细胞活力的药物、降低内膜细胞损伤的药物、促进VEGF表达的药物、维持子宫内膜基质细胞干性和刺激增殖药物中的任意一种或多种组合；

所述治疗母胎免疫耐受障碍相关性疾病的药物为维持或增强免疫耐受性作用的药物、治疗自发性流产的药物、以及提高T辅助淋巴细胞水平的药物的任意一种或多种组合；

所述提高受精卵正常发育率的试剂组合物为促进受精卵、胚泡或囊胚发育成熟的试剂，或含有该外泌体的受精卵培养基或体外受精用培养基。

3.根据权利要求1～2任一项所述的蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途，其特征在于，该外泌体的制备方法如下：

A、分离蜕膜NK细胞和蜕膜NK细胞亚群

将蜕膜组织酶解消化后获取细胞悬液，而后通过密度梯度离心法得到淋巴细胞，然后利用anti-CD56抗体、anti-CD16抗体和anti-CD49a抗体，从中分离标志物为CD56^brightCD16^-CD49a⁺的蜕膜NK细胞；再根据需要利用anti-CD39抗体，anti-CD27抗体，anti-CD160抗体和anti-TIGIT抗体，分离蜕膜NK细胞亚群；

B、NK细胞体外培养

将NK细胞或细胞亚群转移至不添加血清的CTS AIM-V培养基，1640培养基或DMEM培养基中，37℃、5％CO₂环境中培养时间为24-96小时；

C、外泌体分离

将步骤B中的液体培养基滤膜过滤后，依次经4℃，1000g离心10min；4℃，2000g离心20min；4℃，10000g离心30min；110000g离心90min后，弃上清，使用磷酸盐缓冲液重悬沉淀；再次110000g离心90min，弃上清，少量磷酸盐缓冲液重悬沉淀，0.45μm滤膜过滤，得到外泌体。

4.根据权利要求1所述的蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途，其特征在于：

其中，所述药物是以外泌体作为唯一活性成分或者是包含该外泌体的药物组合物，

所述辅助治疗剂是含有该外泌体的试剂组合物。

5.根据权利要求4所述的蜕膜NK细胞来源外泌体在制备治疗不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途，其特征在于：

其中，所述药物组合物为溶液剂。