[发明专利]蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途

说明书

本发明提供了蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途。通过实验证实，该外泌体通过促进子宫内膜厚度增加、增强子宫内膜细胞活力、降低内膜细胞损伤、促进VEGF表达、维持子宫内膜基质细胞干性和刺激增殖的方式治疗子宫内膜生长障碍性疾病，使得子宫内膜损伤模型小鼠的受孕成功率由20％提高至50～70％；通过发挥免疫耐受性作用、降低自发性流产率以及提高T辅助淋巴细胞水平治疗母胎免疫耐受障碍相关性疾病。此外，本发明所述外泌体无论对体内受精的受精卵，还是体外受精的受精卵，均能够以倍数方式有效提高其发育率，同时还提高了体外受精率移植的着床率和产仔率，对于不孕不育的治疗起到积极的辅助作用。

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途、该外泌体的制备方法以及含有该外泌体的药物组合物。

背景技术

子宫内膜损伤主要为内膜基底层的损伤，其主要原因与妊娠期刮宫有关，与正常子宫内膜相比，妊娠期子宫内膜基底层疏松，更容易受到损伤。基于我国国情以及人工流产率逐渐增加的现状，子宫内膜受损的发生情况不容忽视。子宫内膜基底层受损，可能导致子宫内膜干细胞受损或缺失；与此同时，损伤内膜局部的感染和无菌性炎症会破坏干细胞的壁龛微环境，造成上皮和间质细胞再生修复发生障碍，血管形成受阻，致密纤维组织形成，最终导致宫腔仅覆盖少量内膜，甚至无内膜，腺体萎缩，宫腔失去正常形态及功能。进一步的，宫腔内的免疫情况紊乱进一步介导子宫内膜免疫性流产的风险。

NK细胞是存在子宫内膜一种固有免疫细胞。在妊娠早期，NK细胞占蜕膜中淋巴细胞总数的40-70％，是正常蜕膜中含量较高的一类的淋巴细胞。现代生殖医学研究认为，人类蜕膜NK(dNK)细胞具有独特的CD56^brightCD16^-KIR⁺CD9⁺CD49a⁺表型，与外周NK细胞不同，几乎没有细胞毒性。蜕膜NK细胞在蜕膜组织局部的参与促进新生血管生成、组织重塑、免疫调节和胎盘形成。

近年来的前沿热点研究显示，活细胞能分泌大量的外泌体(exosome)，外泌体是胞内体逆出芽形成多囊泡胞内体，多囊泡胞内体与细胞膜融合，向细胞外释放形成外泌体。几乎所有的细胞都可以分泌外泌体。这些外泌体的特点是：直径在30-150nm之间；密度在1.13-1.19g/mL之间；表达特异性的蛋白，携带了亲本细胞的重要信号分子，包括蛋白质、脂质和RNA等；保持着与亲代细胞相似的生活学活性。

根据现有探究，并未公开或提示利用蜕膜NK细胞来源的外泌体具有何功能，更无公开或提示蜕膜NK细胞来源的外泌体制备产品以用于疾病的治疗的技术方案，这些都是未知的和需要证实的。另一方面，蜕膜NK细胞群本身是具有极强的异质性的，即具有CD56^brightCD16^-KIR⁺CD9⁺CD49a⁺表型的蜕膜组织内NK细胞还可以根据其表面标志物的表达不同分为多群，且功能各异。现有技术没有公开或提示表达特异性标志物的蜕膜NK细胞亚群来源的外泌体制备产品以用于疾病治疗的技术方案。

发明内容

本发明是为解决上述技术问题进行的，目的在于提供一种蜕膜NK细胞来源外泌体的用途、制备方法以及含有该外泌体药物组合物。

本发明的第一方面在于提供蜕膜NK细胞及其细胞亚群来源外泌体在制备不孕不育相关疾病药物及辅助治疗剂中的用途。

本发明所述蜕膜NK细的表面标志物为CD56^brightCD16^-CD49a⁺，所述细胞亚群是表面标志物为CD39⁺，CD27⁺，CD160⁺及TIGIT⁺中的任意一种或多种的组合的蜕膜NK细胞。