[发明专利]一种精确检测发酵液中丁二胺含量的方法

权利要求书

1.一种检测发酵液中丁二胺含量的方法，其特征在于，以1,7-庚二胺和/或1,6-己二胺二盐酸盐为内标物，对加入内标物的发酵液进行HPLC检测，再用校准模型对检测结果校准，计算 得到丁二胺含量；

所述校准模型为：其中，K：转换系数，A₁：丁二胺衍生物峰面积，T₁：发酵液体系中丁二胺浓度，A₂：内标衍生物峰面积，T₂：内标浓度；

具体包括如下步骤：

(1)建立模拟丁二胺发酵液体系：向用于微生物发酵的培养基中加入不同浓度的酵母提取物，建立不同的培养基体系，然后向建立的培养基体系中加入丁二胺标准品，得到不同浓度的模拟丁二胺发酵液体系；

(2)待测样品前处理：在步骤(1)建立的每个丁二胺发酵液体系中添加内标物和衍生试剂丹磺酰氯进行衍生化反应，然后用乙醚进行萃取，将萃取液氮吹，再用乙腈溶液复溶，经滤膜过滤后进行HPLC检测；

(3)建立丁二胺检测校准曲线：根据步骤(2)测定的丁二胺和内标物的丹磺酰氯衍生物浓度绘制内标物峰面积与酵母提取物浓度的关系曲线A和酵母提取物浓度与转换系数K的关系曲线B；

(4)待测丁二胺发酵液样品前处理：向待测发酵液样品中加入内标物和衍生试剂丹磺酰氯进行衍生化反应，然后用乙醚进行萃取，将萃取液氮吹，再用乙腈溶液复溶，经滤膜过滤后进行HPLC检测；

(5)根据HPLC检测获得的内标物衍生物峰面积，从关系曲线A中找到相对应的酵母提取物浓度，再根据确定的体系中酵母提取 物浓度，从关系曲线B中确定该体系的转换系数K，最后通过公式计算丁二胺的浓度；其中，K：转换系数，A₁：丁二胺衍生物峰面积，T₁：发酵液体系中丁二胺浓度，A₂：内标衍生物峰面积，T₂：内标浓度。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述转换系数是以发酵液中的干扰物浓度为参比计算获得。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述干扰物为酵母提取物、多肽或氨基酸。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述内标物为1,7-庚二胺，或1,6-己二胺二盐酸盐，或1,7-庚二胺和1,6-己二胺二盐酸盐按摩尔比为1:1的混合物。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述衍生试剂丹磺酰氯母液用丙酮溶解配制。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，衍生化是在60-70℃水浴避光反应25-40min。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HPLC检测条件为：使用C18色谱柱，检测波长为254nm，流动相分别为超纯水和乙腈流速为0.8mL/min，样品进样量为10μL；检测时间≥21min。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，A相为超纯水，B相为乙腈，采用梯度洗脱，洗脱程序具体为：

0-6min：55％-70％B；6-10min：70％B；10-18min：70-95％B；18-19min：95％B；19-20min：95-55％B；20-21min：55％B。

9.权利要求1～8任一方法在食品、医药、化学领域检测丁二胺或其盐方面的应用。