[发明专利]和肽素化学发光免疫检测试剂盒及其制备方法

权利要求书

1.一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：

链霉亲和素带有Tosyl官能团的磁颗粒R1；化学发光标记物标记的和肽素抗体R2；偶联和肽素衍生物R3。

2.根据权利要求1所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的链霉亲和素带有Tosyl官能团的磁颗粒的粒径是3～6μm。

3.根据权利要求1所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物标记的抗体中，和肽素抗体与化学发光标记物的标记摩尔比例是1:3～10，缓冲液为100～500mM BISTRIS丙烷，0.05％～0.1％PC300及0.05％～0.1％吐温-20,抗体终浓度为0.1～2μg/mL。

4.根据权利要求3所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述化学发光标记物为吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺和三联吡啶钌。

5.根据权利要求1所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记的和肽素衍生物中，和肽素衍生物与偶联标记物的标记摩尔比例是1:5～10，缓冲液为缓冲液为100～500mM BISTRIS丙烷，0.05％～0.1％PC300及0.05％～0.1％吐温-20，终浓度为0.2～3μg/mL。

6.根据权利要求5所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述偶联标记物为生物素或生物素衍生物。

7.根据权利要求1所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括化学发光底物液，所述化学发光底物液包括A液和B液；

其中所述化学发光底物液A为硝酸和过氧化氢溶液，B为氢氧化钠溶液。

8.根据权利要求1所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒还包括和肽素校准品。

9.根据权利要求8所述的一种和肽素化学发光免疫检测试剂盒，其特征在于，所述和肽素校准品的浓度分别为0pg/mL、10pg/mL、40pg/mL、200pg/mL、500pg/mL、2500pg/mL和5000pg/mL的和肽素蛋白溶液。

10.根据权利要求1所述的一种上述的和肽素的化学发光免疫检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：将链霉亲和素带有Tosyl官能团的磁颗粒溶液和TBST溶液混匀后，放置在磁分离器上，直至上清液无混浊，弃上清，留取磁颗粒，清洗后在缓冲液中配成固相试剂R1；

步骤二：将和肽素抗体放入离心管中离心，然后加入碳酸缓冲液，混匀后加入化学发光标记物溶液离心，将离心管密封后放入避光暗盒中，然后将暗盒放入气浴恒温振荡器中混匀，加入封闭液，放入气浴恒温振荡器中混匀，将封闭好的抗体经过纯化、收集，然后放入缓冲液中稀释，保存，得到R2试剂；

步骤三：取和肽素衍生物，将TRIS缓冲液透析纯化后加入已活化的偶联标记物，2～8℃反应2-3h，再转入室温继续反应30-60min，最后加入赖氨酸反应30-60min，将纯化后的和肽素衍生物浓溶液用缓冲液稀释，得到R3试剂。