[发明专利]CAR-T细胞和检测方法

权利要求书

1.一种CAR-T细胞，其特征在于，所述CAR-T细胞能够表达嵌合抗原受体和分泌目标抗体，所述目标抗体的N端或C端融合有检测标签，且所述检测标签能够被检测抗体特异性识别和结合，以对所述目标抗体进行定量检测。

2.根据权利要求1所述的CAR-T细胞，其特征在于，

所述检测标签为多肽；

优选地，所述检测标签选自FLAG、HA、HA1、c-Myc、Poly-His、Poly-Arg、Strep-TagII、AU1、EE、T7、4A6、ε、B、gE以及Ty1中的任意一种。

3.根据权利要求1或2所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述目标抗体为能够封闭PD-1/PD-L1信号通路的抗体；

优选地，所述目标抗体为PD-1抗体或其功能性片段；

优选地，所述目标抗体为PD-L1抗体的功能性片段；

优选地，所述功能性片段的结构形式选自F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv和scFv中的任意一种；

优选地，所述目标抗体选自PD-1抗体的scFv，或者所述目标抗体选自PD-L1抗体的scFv；

优选地，所述目标抗体的轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示，重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示；

优选地，所述目标抗体的位于轻链可变区与重链之间可变区的铰接区序列的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.根据权利要求3所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述目标抗体的C端融合有所述检测标签；

优选地，所述目标抗体通过如下信号肽实现分泌表达：hIgG SP；

优选地，所述检测抗体标记有信号指示剂；

优选地，所述信号指示剂为荧光基团或者用于催化底物显色的催化酶；

优选地，所述荧光基团选自BV421；

优选地，所述催化酶选自辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶。

5.根据权利要求1或2所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体上的抗原结合结构域所识别和靶向的靶点为肿瘤；

优选地，所述肿瘤为血液肿瘤或实体瘤；

优选地，所述血液肿瘤选自B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、急性淋巴白血病和多发性骨髓瘤中的任意一种；

优选地，所述实体瘤选自胃癌、肝癌、肺癌、小肠癌、前列腺癌、宫颈癌、结直肠癌、大肠癌、乳腺癌、卵巢癌、淋巴癌、鼻咽癌、骨癌、肾上腺肿瘤、脑胶质瘤、非小细胞肺癌和膀胱肿瘤中的任意一种；

优选地，所述靶点为B细胞淋巴瘤；

优选地，所述靶点为B细胞淋巴瘤细胞膜上的CD19抗原；

优选地，所述抗原结合结构域选自CD19抗体的scFv；

优选地，所述CD19抗体为FMC63。

6.根据权利要求5所述的CAR-T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体上的跨膜结构域选自如下蛋白分子中的至少一种的跨膜结构域：CD8、CD3ε、CD4、CD9、CD45、CD37、CD5、CD28、CD33、CD16、CD22、CD154、CD134和CD137；

优选地，所述跨膜结构域为CD8跨膜结构域；

优选地，所述嵌合抗原受体上的共刺激信号传导区包含如下共刺激分子中至少一种的细胞内结构域：4-1BB、CD3ζ、CD3δ、CD134、CD79a、CD137、ICD3ε、CD5、CD79b、CD5、CD66d、OX40、CD22、CD2、CD3γ、CD154和CD28；

优选地，所述共刺激信号传导区包含CD3ζ和4-1BB的胞内结构域。

7.一种定量检测如权利要求1-6任一项所述CAR-T细胞所分泌的抗体的方法，其特征在于，其包括：将所述CAR-T细胞的培养上清液与检测抗体混合，得到混合液。