[发明专利]CAR-T细胞和检测方法

说明书

本发明公开了一种CAR‑T细胞和检测方法，涉及CAR‑T细胞技术领域。该CAR‑T细胞能够分泌目标抗体，目标抗体的N端或C端融合有检测标签。本发明公开的CAR‑T细胞其分泌的抗体可以被定量检测，为评估与监测CAR‑T分泌抗体的量与其疗效的关系提供了基础和保证。

技术领域

本发明涉及CAR-T细胞技术领域，具体而言，涉及一种CAR-T细胞和检测方法。

背景技术

PD-1(Programmed Cell Death Protein)程序性死亡受体-1，主要表达在B祖细胞，活化的T细胞和B细胞表面，是免疫检查站点家族的成员之一。研究发现，肿瘤细胞会通过表达PD-1的配体PD-L1来逃避免疫系统的监护，当肿瘤细胞通过其表面的PD-L1与T细胞表面的PD-1结合时，PD-1会在免疫受体复合物附近募集大量的酪氨酸磷酸酶SHP2，造成TCR相关信号的去磷酸化从而削弱TCR信号通路，进而造成T细胞的耗竭。

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法，简称CAR-T技术，是通过体外改造病人的T细胞，使病人的T细胞具备识别肿瘤细胞的能力，体外扩大培养后回输到病人体内进行治疗的一种方法。目前，以CD19为靶点的CAR-T在治疗B细胞血液肿瘤方面取得了巨大的成果，但根据临床研究结果来看，CD19 CAR-T在治疗B细胞淋巴瘤方面的疗效远远不及在治疗B细胞急性淋巴细胞白血病方面的疗效，这可能是B细胞淋巴瘤表面表达有大量的PD-L1分子造成的，虽然目前尚未有文献对B-ALL病人B细胞上PD-L1分子表达水平报道，但是在针对弥漫性大B细胞淋巴瘤的临床研究中发现病人B细胞淋巴瘤表面的PD-L1分子表达水平与临床疗效直接相关，B细胞淋巴瘤表面PD-L1表达低的病人，在综合疗法、单独化疗和PD-1抗体免疫疗法中均有着更高的生存率，与此同时，再对其他靶点实体肿瘤进行治疗的过程中，肿瘤细胞也会通过过表达PD-L1来逃避CAR-T对其进行杀伤，提示CD19 CAR-T治疗过程中，封闭PD-1/PD-L1信号通路将会最大程度的增加CD19 CAR-T的临床疗效，使患者受益。

运用CAR-T疗法联合PD-1/PD-L1抗体或其他免疫检查站点家族成员抗体疗法在肿瘤治疗过程中疗效明显，但是由于肿瘤微环境的存在，到达肿瘤部位的抗体药物较少，同时由于抗体药物在体内的动态代谢过程，病人治疗成本较大，鉴于此，很多研究者将CAR-T疗法与免疫检查站点疗法联合使用，生产出能分泌PD-1/PD-L1单链抗体的CAR-T，得到了积极的实验结果。

在分泌PD-1/PD-L1单链抗体的CAR-T在应用中，通常需要对其分泌的单链抗体进行定量，以便能够合理地控制用量范围。然而，目前缺乏对这类可分泌抗体的CAR-T细胞类型所分泌的抗体进行有效定量检测的手段。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种CAR-T细胞和检测方法。本发明提供的CAR-T细胞其可以分泌抗体，且分泌的抗体可以被定量检测，本发明提供的检测方法可以有效地定量检测CAR-T细胞分泌的抗体。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供一种CAR-T细胞，上述CAR-T细胞能够表达嵌合抗原受体和分泌目标抗体，上述目标抗体的N端或C端融合有检测标签，上述检测标签能够被检测抗体特异性识别和结合，以对上述目标抗体进行定量检测，所述检测抗体标记有信号指示剂。

本发明提供的CAR-T细胞能够表达嵌合抗原受体和分泌抗体，所分泌的抗体的N端或C端融合了检测标签，检测标签可以被检测抗体特异性识别和结合，这样，利用检测抗体与检测标签的特异性结合原理，再通过对检测抗体上的信号指示剂的信号强度检测，将信号强度值代入匹配的标准曲线公式中，即可定量确定CAR-T细胞所分泌的抗体含量。本发明为评估与监测病人血清中或肿瘤微环境中CAR-T分泌抗体的量与疗效的关系提供了基础和保证。