[发明专利]恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法

权利要求书

1.一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1.将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；

S2.加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO₂培养箱内培养，每隔3d换液一次；

S3.待间充质干细胞融合达70-80％，用胰酶消化，进行传代培养；

S4.将间充质干细胞传代至第3-5代，细胞融合达60～80％时，更换无外泌体血清的培养基继续培养；

S5.收集细胞上清，离心去除细胞或细胞碎片，用超速离心法提取得到间充质干细胞外泌体；

S6.采用改良二步酶法对毛乳头细胞进行分离培养；

S7.将获得的毛乳头细胞在DEME基础培养基中进行培养，所述DEME基础培养基中含有PDGF、KGF、VEGF以及步骤S5中获得的充质干细胞外泌体。

2.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述步骤S6中改良二步酶消化法的步骤为：

S1.经过手术后的单个毛囊用含1%的双抗的PBS溶液清洗毛囊组织2～3次；

S2.显微镜下将毛球部组织整个分离出来，将残留的毛母质清除干净，将组织移至含PBS溶液的培养皿中；

S3.加入0.2%胶原酶IV，在37℃温度下消化1h～2h，用吸管吹打组织，待毛乳头组织周边的真皮鞘组织全部解离出来后，在显微镜下挑选出单个毛乳头组织，放置入新的培养皿中；

S4.毛乳头组织在37℃、5%CO₂培养箱中进行贴壁培养，每隔3天更换一次培养基，待细胞生长融合达到60-80%进行消化收集获取原代毛乳头细胞。

3.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述PDGF的浓度为100.0-120.0ng/ml 。

4.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述PDGF的浓度为110.0ng/ml。

5.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述KGF的浓度为250.0-350.0ng/ml。

6.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述KGF的浓度为300.0ng/ml。

7.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述VEGF的浓度为500.0-600.0ng/ml。

8.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述VEGF的浓度为550.0ng/ml。

9.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体浓度为60.0-80.0ng/ml。

10.根据权利要求1所述的一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，其特征在于：所述间充质干细胞外泌体浓度为70.0ng/ml。