[发明专利]恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法

说明书

本发明公开了一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，包括以下步骤：将去除动静脉的脐带剪碎，加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液培养，待间充质干细胞融合达70‑80％，用胰酶消化进行传代培养；传代至第3‑5代细胞融合达60‑80％时，更换无外泌体血清的培养基继续培养；用超速离心法提取得到间充质干细胞外泌体；采用改良二步酶法对毛乳头细胞进行分离培养；将获得的毛乳头细胞在DEME基础培养基中进行培养，DEME基础培养基中含有PDGF、KGF、VEGF以及充质干细胞外泌体。本发明能够有效的恢复毛囊源细胞干性，其通过分泌多种调控因子从而调节毛囊细胞正常的生理代谢，从毛囊生理性角度解决了脱发的问题。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体是一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法。

背景技术

脱发，在当今已经成为一种普遍存在的“现代病”。脱发的原因和种类各不相同，无论是因为压力还是因为病理原因，无论是脂溢性脱发还是产后脱发，都无一不给人们的生活带来极大的烦恼和不便。虽然脱发不属于严重的疾病,但是对患者的心理会产生较大的影响。尽管目前对脱发的了解和认识不断增多，支持或辅助的治疗措施层出不穷，但临床上仍然期待发现更有效、更全面的治疗方法。

目前国内外用于治疗脱发的药品主要为西药，如米诺地尔，其经头皮吸收后可扩张头皮下血管，改善毛囊周围的微循环，减少毛囊周围炎症细胞浸润，从而使萎缩的毛囊增大并促进毛发的生长，使毳毛变成终毛；此外，非那雄胺是一种能抑制5α-还原酶的活性以阻止雄性激素合成的药物。但米诺地尔和非那雄胺主要是针对雄激素性脱发有较好的疗效，有一定局限性，且要长期用药，对人体会产生副作用。而且均没有从毛囊生理性生长的角度去解决问题，所以效果并不显著。

随着对毛囊微观结构及毛发再生机理研究的深入发现毛发再生受到毛囊干细胞及毛囊周围干细胞的综合调控。干细胞是一类具有自我复制，自我更新的原始细胞，具有向多种组织细胞分化的能力，在体内能通过分泌多种调控因子从而调节组织器官的正常生理代谢。因此，研发一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法成为治疗脱发药物的发展趋势。

发明内容

本发明就是为了解决上述技术问题，所提供了一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法。

本发明是按照以下技术方案实现的。

一种恢复毛囊源细胞干性或增殖能力的方法，包括以下步骤：

S1.将去除动静脉的脐带剪碎，充分洗涤；

S2.加入含牛血清和青链双抗的低糖DMEM培养液，置于CO₂培养箱内培养，每隔3d换液一次；

S3.待间充质干细胞融合达70-80％，用胰酶消化，进行传代培养；

S4.将间充质干细胞传代至第3-5代，细胞融合达60～80％时，更换无外泌体血清的培养基继续培养；

S5.收集细胞上清，离心去除细胞或细胞碎片，用超速离心法提取得到间充质干细胞外泌体；

S6.采用改良二步酶法对毛乳头细胞进行分离培养；

S7.将获得的毛乳头细胞在DEME基础培养基中进行培养，所述DEME基础培养基中含有PDGF、KGF、VEGF以及步骤S5中获得的充质干细胞外泌体。

进一步的，所述步骤S6中改良二步酶消化法的步骤为：

S1.经过手术后的单个毛囊用含1%的双抗的PBS溶液清洗毛囊组织2～3次；

S2.显微镜下将毛球部组织整个分离出来，将残留的毛母质清除干净，将组织移至含PBS溶液的培养皿中；