[发明专利]一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置

权利要求书

1.一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置，其特征在于：包括Golli-MPB、STIM1、FGF19、FGFR4四种蛋白标记物和以所述四种标记物作为检测靶标的试剂盒，根据所述四种标记物的mRNA的表达量判断扁平苔藓癌前病变的发展阶段，所述试剂盒包括荧光定量PCR试剂、Western-blot蛋白印迹、逆转录试剂和DAB显色试剂。

2.根据权利要求1所述的一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置，其特征在于：所述荧光定量PCR试剂、Western-blot蛋白印迹和逆转录试剂检测Golli-MPB和STIM1两种蛋白，所述DAB显色试剂检测FGF19和FGFR4两种蛋白。

3.根据权利要求1所述的一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置，其特征在于：所述Western-blot蛋白印迹包括细胞裂解液，蛋白酶抑制剂，SDS-PEGA凝胶试剂盒，PVDA，兔源抗STIM1单克隆抗体，辣根过氧化物酶(HRP)标记山羊抗鼠IgG。

4.根据权利要求1或3所述的一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置，其特征在于：所述Golli-MPB和STIM1两种蛋白的检测包括如下步骤：

S1、样本总RNA提取，将口腔扁平苔藓组织纯化为外周血淋巴细胞，经离心、干燥、溶解后进行逆转录；

S2、总RNA浓度和纯度检测，通过紫外分光光度计测定S1中样品的RNA浓度和纯度；

S3、将总RNA逆转录为cDNA，通过逆转录试剂盒调制反应液，冷却后在-20℃下贮存cDNA；

S4、实时定量PCR，根据Golli-MPB和STIM1基因序列设计引物，扩增后通过荧光定量PCR仪检测基因表达量；

S5、Western-blot蛋白印迹，向样本中加入细胞裂解液和蛋白酶抑制剂，离心后通过核算蛋白测量仪测量总蛋白浓度，蛋白变性后经SDS-PAGE电泳，电泳后转膜，转膜结束后经拍照成像，通过统计学分析比较mRNA的表达差异。

5.根据权利要求4所述的一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置，其特征在于：S4中，以GAPDH为内参基因，Golli-MPB基因序列的正向引物序列为5’-AAATGCCGAGAAGGCCAGTA-3’,反向引物序列为5’AAAAGAGGCGGATCAAGTGG-3’,STIM1基因序列的正向引物序列为5’-GCAGCAGAGTTTTGCCCAAT-3’，反向引物序列为5’-TGACTTCCATGCCTTCCACA-3’。

6.根据权利要求1所述的一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置，其特征在于：所述DAB显色试剂包括浓缩DAB溶液和DAB底物液，还包括鼠抗人FGF19抗体、鼠抗人FGFR4抗体、柠檬酸抗原修复液、盐酸乙醇、苏木素染色剂和氨水。

7.根据权利要求1或6所述的一种用于口腔扁平苔藓癌前病变的检测装置，其特征在于：所述FGF19和FGFR4两种蛋白的检测包括如下步骤：

1)筛选口腔扁平苔藓组织蜡块，将组织切片附于经多聚赖氨酸附膜的载玻片上，经脱蜡、清洗后机芯抗原热修复；

2)修复后在双氧水内室温孵育，消除内源性过氧化物酶的活性，蒸馏水冲洗，并PBS浸泡，除去PBS后，滴加抗体，再经PBS冲洗、清除，滴加HRP试剂，再经PBS冲洗、清除，通过DAB显色剂显色，充分冲洗后复染封片，显微镜观察。