[发明专利]氟比洛芬酯对映异构体及杂质A的液相色谱分离检测方法

说明书

本发明提供了一种氟比洛芬酯对映异构体及杂质A的液相色谱分离检测方法，将待测的氟比洛芬酯料液、杂质A对照液稀释溶解；将包含杂质A的氟比洛芬酯供试溶液上样到十八烷基硅烷键合硅胶柱及五氟苯基硅烷键合硅胶串联柱上，对所述氟比洛芬酯进行分离检测；以甲醇和磷酸水溶液为流动相，进行等度洗脱；洗脱结束后使用紫外检测器检测，得到待测样品的信号强度，将得到的信号强度代入相应的标准曲线，计算得到待测样品中氟比洛芬酯及其对映异构体、杂质A及其对映异构体四种组分的浓度。本发明能够很好地分离氟比洛芬酯的对映异构体与杂质A的对映异构体，分离度良好，分离结果稳定，方法再现性和稳定性上佳。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及氟比洛芬酯对映异构体及杂质A的液相色谱分离检测方法。

背景技术

氟比洛芬是一种非甾体类抗炎药，具有抗炎镇痛作用。氟比洛芬酯是氟比洛芬的前体药物，化学名为(±)-2-(2-氟-4-联苯基)丙酸-1-乙酰氧基乙酯。其在临床上应用十分广泛，可用于手术后及各种癌症的镇痛。作用机理主要是抑制花生四烯酸环氧酶的活性，从而抑制疼痛和炎症反应的前列腺素的合成。

氟比洛芬酯有两对对映异构体，目前临床上使用的氟比洛芬酯药物为其消旋体，制剂类型为脂肪乳注射液，该剂型是依据药物传递系统概念研发的以脂肪乳为药物载体，包封氟比洛芬酯的制剂，其注射时刺激性小，止痛作用起效快。该消旋体具有两种光学异构体，S型和R型。目前国内外的一些研究表明，S-氟比洛芬酯对环氧合酶有抑制性，起主要的抗炎镇痛活性，R-氟比洛芬酯对环氧合酶无抑制作用，但能起到镇痛作用。也有研究表明R-氟比洛芬酯能够通过调整γ-分泌酶，选择性抑制Aβ1-42淀粉状前体蛋白从而防治阿尔茨海默病，并由美国Myriad genetics公司开发，正处于阿尔茨海默病的三期临床研究。专利CN1736374A公开了一种R-氟比洛芬酯在制备镇痛及治疗癌症或老年痴呆药物中的用途。专利CN102670502A公开了一种以S(+)-氟比洛芬酯为药用活性成分的注射乳剂，从而降低氟比洛芬酯的临床用量，解决副作用大的缺点。专利CN103301063A也公开了一种S(+)-氟比洛芬酯注射乳剂，其给出了氟比洛芬酯的S(+)-对映体相对于氟比洛芬酯消旋体注射液的有效剂量。由此可见，由于氟比洛芬酯的对映异构体在体内药理作用的差异，为便于进行立体选择性药效和药动学研究，确保疗效，保证药物的质量控制，对氟比洛芬酯药物两对对映异构体的分离检测具有重要意义。

氟比洛芬酯与其主要相关物质(杂质A：脱氟氟比洛芬酯)结构相似(图1)，都有两个手性中心，各有两对对映异构体(enantiomers)或一对非对映异构体。因二者结构相似，仅相差一个F元素，存在两个手性中心，每个成分在反相色谱柱上会出现两个峰，因此分离氟比洛芬酯与杂质A的困难非常大。

为确保氟比洛芬酯注射液的质量控制，有必要提供一种分析方法能够分离检测氟比洛芬酯的两对对映异构体以及其相关物质。

专利申请CN201710127127.3公开了一种氟比洛芬酯注射液中有关物质的检测方法。此方法描述了在反相色谱柱上用梯度的方法分离氟比洛芬酯与其主要相关物质杂质的两对非对映异构体的方法。然而，该发明的色谱方法较为复杂，并且仅定量地报告了氟比洛芬酯的两对对映异构体的基线分离，而相关物质杂质A的两对对映异构体之间的分离以及它们与氟比洛芬酯的两对对映异构体之间的分离结果则没有详尽描述。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供一种氟比洛芬酯的对映异构体及其相关物质杂质A的色谱分离检测方法，本发明分离度良好，操作流程简易，色谱方法简单。

为实现上述技术目的，本发明的技术方案是，一种氟比洛芬酯对映异构体及杂质A的液相色谱分离检测方法，所述液相色谱分离检测方法具体为：

(1)将待测的氟比洛芬酯供试溶液、杂质A对照液稀释溶解，备用；

(2)将步骤(1)中包含杂质A的氟比洛芬酯供试溶液上样到十八烷基硅烷键合硅胶柱及五氟苯基硅烷键合硅胶串联柱上，对所述氟比洛芬酯进行分离检测；