[发明专利]测序内标分子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种测序内标分子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：以1000±200bp为窗口，获得与待测样本中基因序列非同源的unique植源性序列；

S2：从上述unique植源性序列中挑选出GC含量为35％-70％的序列；

S3：从上述序列中筛选出无微卫星的序列；

S4：从上述序列中筛选出连续碱基序列数小于8的序列；

S5：在上述序列中，以测序读长±5bp为窗口进行两两比对，对筛选出的序列做同源性筛查，获得序列相似性低的序列，即为筛选序列；

S6：以所述筛选序列为内标分子的基础序列，设计合成扩增引物，以所述植源性基因组为模板，进行PCR扩增，即得测序内标分子。

2.根据权利要求1所述的测序内标分子的制备方法，其特征在于，所述S1中，所述待测样本中基因序列的类型为人源和微生物基因组；所述植源性序列来源于拟南芥。

3.根据权利要求1所述的测序内标分子的制备方法，其特征在于，所述S5中，所述序列相似性低的序列指：两条序列之间具有连续相同碱基的长度低于15bp。

4.根据权利要求1所述的测序内标分子的制备方法，其特征在于，所述S6中，进行二次PCR扩增。

5.根据权利要求1所述的测序内标分子的制备方法，其特征在于，所述测序内标分子长度为400bp-800bp。

6.根据权利要求1-5任一项所述的测序内标分子的制备方法，其特征在于，扩增获得测序内标分子后，进行体外转录为单链RNA，即得转录组内标分子。

7.根据权利要求6所述的测序内标分子的制备方法，其特征在于，进行体外转录RNA时，在上游引物的5＇端添加TAATACGACTCACTATAGGG序列。

8.权利要求1-7任一项所述的测序内标分子的制备方法制备得到的筛选序列和/或测序内标分子。

9.根据权利要求8所述的测序内标分子，其特征在于，所述筛选序列选自：SEQ ID NO.1所示序列～SEQ ID NO.78所示序列。

10.权利要求8所述的测序内标分子在宏基因组病原微生物检测污染监控中的应用。